论文部分内容阅读
目的：(1)研究Reelin信号通路相关基因的多态性与汉族儿童孤独症的关联；(2)研究Reelin信号通路相关基因的交互作用与汉族儿童孤独症易感性的关系；(3)研究Reelin信号通路相关基因的多态性与汉族儿童孤独症临床表型的关系。方法：(1)采用Illumina CNV 370-Duo芯片对455例符合DSM-IV诊断标准的儿童孤独症患者及97例正常对照进行全基因组SNP分型,从中选取Reelin信号通路6个基因(RELN, DAB1、VLDLR、LRP8、FYN, CDK5)所有SNP的数据,与中南大学医学遗传学国家重点实验室遗传资源库的另外358例正常对照的相应数据合并,对数据进行筛选,然后对每个基因均采用Haploview4.1软件进行单位点的病例-对照关联分析,以及基于连锁不平衡分析基础上的单体型病例-对照关联分析。置换检验被用于对关联分析的结果进行校正(置换次数=1000)。(2)采用“标记SNP+连锁结构域”策略选择基因间交互作用研究的SNP位点,6个基因共计入选48个位点。多因子降维分析(MDR)方法被用于探索孤独症患者Reelin信号通路相关基因间的交互作用,选择具有最大的交叉验证一致性、最大检验准确度且置换检验结果具有显著性的组合作为基因间交互作用的最佳模型。(3)剔除15例临床资料不完整的患者,将440例孤独症患者按照“退化”临床表型分为退化组(180例)和非退化组(260例),按照“不遵从行为”临床表型分为不遵从组(177例)和遵从组(263例),χ2检验被用于比较上述48个位点基因型频率和等位基因频率的组间差异。结果：(1)经置换检验后,单位点关联分析显示RELN的99个SNPs与孤独症均无显著关联(P均大于0.05)；单体型关联分析发现AAGTATCATGGG单体型频率和CTTAGCCG单体型频率在对照组显著高于孤独症组(χ2分别为8.658,10.000；校正后的P值分别为0.015,0.002)；(2)经置换检验后,单位点关联分析显示DAB1的154个SNPs与孤独症均无显著关联(P均大于0.05),单体型关联分析发现GGTTTGGCATTTC单体型频率在孤独症组显著高于对照组(χ2=8.461,校正后的P=0.019)；(3)经置换检验后,LRP8、VLDLR、FYN和CDK5所有SNPs的等位基因频率及单体型频率在孤独症组和对照组无显著性差异(P均大于0.05)；(4) MDR分析显示三位点基因型组合(rs1454627-rs6943822-rs722187)是孤独症患者Reelin信号通路相关基因间交互作用的最佳模型(交叉验证一致性9/10,检验准确度0.822,P<0.001)；(5)RELN的rs10487160位点的基因型分布和等位基因分布在退化型孤独症亚组和非退化型孤独症亚组间均存在显著性差异(χ2分别为10.570和10.190,P值分别为0.005和0.001),退化亚组GG基因型频率与G等位基因频率显著高于非退化亚组；rs12666897位点的基因型分布和等位基因分布在两个亚组间亦存在显著性差异(χ2分别为6.019和4.874,P值分别为0.049和0.027),退化亚组AC基因型频率及C等位基因频率显著高于非退化亚组；(6)RELN的rs17157128位点基因型分布和等位基因分布在不遵从组和遵从组之间有显著性差异(χ2分别为9.165和4.472,P值分别为0.010和0.034),不遵从亚组AA基因型频率和A等位基因频率显著高于遵从亚组；(7)DAB1的rs3131735位点的基因型分布在不遵从亚组和遵从亚组间存在显著性差异(χ2=8.430,P=0.015),AG基因型频率在不遵从组的显著高于遵从组；(8) LRP8的rs1288520位点基因型分布和等位基因分布在退化组和非退化组之间有显著性差异(χ2分别为7.790和7.095,P值分别为0.020和0.008),GG基因型频率和G等位基因频率在退化亚组显著高于非退化亚组。(9)VLDLR的rs1454627位点基因型分布和等位基因分布在退化组和非退化组之间有显著性差异(χ2分别为7.143和4.127,P值分别为0.028和0.042),TT基因型频率和T等位基因频率在退化亚组显著高于非退化亚组；结论：(1)RELN可能不是中国汉族儿童孤独症的易感基因,其AAGTATCATGGG单体型和CTTAGCCG单体型反而可能是孤独症的保护因素；(2)DAB1上的GGTTTGGCATTTC单体型与孤独症存在显著的正性关联,DAB1可能是中国汉族儿童孤独症的易感基因之一；(3)LRP8、VLDLR、FYN和CDK5的单核甘酸多态性均与中国汉族儿童孤独症无关；(4)DAB1-RELN-VLDLR基因间交互作用与中国汉族儿童孤独症的发病机制有关；(5)RELN的rs10487160位点以及rs12666897位点多态性与孤独症患者的“退化”临床表型有关；(6)RELN的rs17157128位点多态性与孤独症患者的“不遵从行为”临床表型有关；(7) DAB1的rs3131735位点多态性与孤独症患者的“不遵从行为”临床表型有关；(8) LPR8的rs1288520位点多态性与孤独症患者的“退化”临床表型有关；(9)VLDLR的rs1454627位点多态性与孤独症患者的“退化”临床表型有关。