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目的:采用去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)诱导心肌细胞凋亡,分别应用β3-AR激动剂及阻滞剂进行干预,观察β3-AR对心肌细胞凋亡的影响,探讨β3-AR与PI3K/Akt和p38MAPK信号通路对心肌细胞凋亡的作用,为β3-AR的信号通路研究提出新的理论。方法:使用优化的Ⅱ型胶原酶和差速贴壁法分离培养心肌细胞,分别用总蛋白法、超速离心法、试剂盒法提取心肌细胞β3-AR膜蛋白。BCA法进行蛋白定量,Western blot法检测蛋白样品中β3-AR提取蛋白的特异性。实验分组:正常对照组;NE诱导组:NE培养48 h;BRL组:β3-AR激动剂(BRL37344)干预+NE培养48 h;SR组:β3-AR阻滞剂(SR59230A)干预+NE培养48 h。TUNEL法及流式细胞仪双染法检测心肌细胞凋亡率;Western blot检测各组凋亡相关因子Bcl-2、Bax和caspases-3蛋白的表达;Western blot和q RT-PCR检测各组PI3K/Akt和p38MAPK信号通路蛋白和m RNA的表达。结果:1.优化心肌细胞的培养方法可获得产量大、浓度高的细胞,能满足后续实验;2.与其他组比较,试剂盒法提取蛋白的浓度最高,差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果示:与其他组比较,试剂盒提取法所得β3-AR膜蛋白含最高,差异均有统计学意义(P<0.05);3.TUNEL法及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率:BRL组细胞凋亡率明显增高,与NE诱导组比较,差异有统计学意义(P<0.05);4.Western blot检测结果示:BRL组caspases-3和Bax/Bcl-2比值增高,与NE诱导组比较,差异有统计学意义(P<0.05);5.Western blot检测结果示:BRL组磷酸化的p38MAPK蛋白表达增高,与NE诱导组比较,差异有统计学意义(P<0.05);SR组磷酸化的Akt蛋白表达增高,与NE诱导组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.试剂盒提取法可有效提高β3-AR膜蛋白的浓度和特异性;2.β3-AR可促进体外培养NE诱导的心肌细胞凋亡;3.β3-AR过度激活可通过下调PI3K/Akt信号和上调p38MAPK信号通路促进心肌细胞凋亡。