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恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病，且在世界范围内发病率逐年上升。但由于目前诊断技术及水平有限，很多癌症患者确诊时已经是晚期，失去了许多治疗的机会。因此寻找一种敏感、快捷、方便、无创的检测方法是目前国内外学者关注的课题。经血清学肿瘤标志物的蛋白定量检测来筛查各种类型肿瘤国内外已有报道，在检测各种类型肿瘤患者中的价值已得到充分肯定。MUC1作为一种新的肿瘤标志物近年来得到了广泛的研究。多种腺癌患者包括乳腺癌、肺癌等外周血中MUC1蛋白水平较正常人升高。近年研究表明，恶性血液病组织及细胞中MUC1水平也较正常人升高，但血清中MUC1粘蛋白的表达水平国内外报道较少。目前，检测外周血MUC1蛋白的方法最常用的为酶联免疫吸附试验（ELISA），但现有的试剂盒多采用单克隆抗体，仅仅是针对某单一抗原表位，而肿瘤患者血清中的黏蛋白是含有多种抗原表位的，这样势必会漏检很多阳性病例，针对目前商业化试剂盒的局限性，本研究通过制备抗人MUC1多克隆抗体，与GP1.4单克隆抗体进行组合，建立了双抗体间接夹心ELISA方法，通过健康人、乳腺癌、肺癌患者外周血MUC1的水平的测定对该试剂盒进行分析评价，并对恶性血液病血清MUC1黏蛋白的表达水平进行了初步检测。研究方法和结果：1. MUC1-GST融合蛋白的制备培养表达MUC1-GST融合蛋白的pGEX-MUC1/BL21细菌，菌体通过超声破碎提取上清液，Glutathione Sepharose4B亲和层初步纯化，非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步纯化，获得较纯的MUC1-GST融合蛋白。2.抗体制备及效价检测重组MUC1-GST融合蛋白免疫家兔，获得高效价家兔抗人MUC1多克隆抗体，效价为320000。3.抗体纯化将家兔血清进行饱和硫酸铵沉淀、Protein A纯化及抗GST抗体的吸收，获得了纯化的家兔抗人MUC1多克隆抗体。4. MUC1标准品的制备经过亲和层析纯化的MUC1-GST融合蛋白进行凝血酶裂解，获得MUC1多肽标准品。5.双抗体间接夹心ELISA法的建立通过抗人MUC1多克隆抗体与GP1.4单克隆抗体的不同组合筛选，成功建立了双抗体间接夹心ELISA方法，其包被抗体为GP1.4单克隆抗体，检测抗体为家兔抗人MUC1多克隆抗体。酶标抗体为HRP标记的山羊抗兔IgG抗体。6.双抗体间接夹心ELISA法最佳工作条件的确定通过棋盘滴定法选择包被抗体、检测抗体和HRP标记的山羊抗兔IgG抗体的最佳工作浓度，包被抗体，检测抗体最佳工作浓度浓度分别为：1ug/ml，15μg/ml；酶标抗体最适稀释比例为1:5000；MUC1标准品的稀释浓度为：0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、4ng/ml、8ng/ml、16ng/ml、32ng/ml，64ng/ml。该试剂盒的灵敏度为0.5ng/ml。7.外周血MUC1蛋白水平的检测通过建立的双抗体间接夹心ELISA法，对收集的225例血清样本（13例乳腺癌，60例肺癌、48例急性髓系白血病、26例急性淋巴细胞白血病、24例淋巴瘤、17例多发性骨髓瘤，20例健康人，7例肺良性疾病，10例良性血液患者）进行检测，结果表明乳腺癌、肺癌患者外周血MUC1蛋白平均水平明显高于健康对照组(P<0.01)，恶性血液病外周血MUC1蛋白水平与健康对照组无显著性差异。进一步绘制ROC曲线分析得出以1.92ng/ml为乳腺癌患者与健康对照组临界值，乳腺癌患者检测的敏感度为100%，正常人的特异度为100%。以1.88ng/ml为肺癌患者与健康人的临界值，肺癌的敏感度为63.3%，健康人的特异度为100%。以1.98ng/ml为肺癌患者与肺良性疾病患者临界值，肺癌的敏感度为61.7%，肺良性疾病的特异度为100%。8.双抗体间接夹心ELISA法与CA15-3试剂盒比较对于乳腺癌，健康对照者同一病例样本用酶联免疫法CA15-3诊断试剂盒进行对比检测，通过绘制ROC曲线对比显示，双抗体间接夹心ELISA法对乳腺癌的诊断准确度明显高于CA15-3试剂盒。结论：1.本研究建立了灵敏度高特异性强的双抗体间接夹心ELISA方法2.对乳腺癌、肺癌诊断的灵敏度及特异度有很大程度的提高，有望开发为临床辅助诊断的常规试剂盒。3.对恶性血液病患者外周血MUC1水平的检测尚待进一步探讨。