论文部分内容阅读
研究背景离体肝切除自体肝移植术是基于肝移植技术治疗肝脏特殊部位肿瘤的一种手术方式，因手术难度大，全球至今开展不多，更无相关基础研究。西南医院肝胆外科开展该类手术多年，手术例数已累计38例，其与肝移植术最大不同之处是在有肝硬化为基础病变下进行超长时间、难度大、复杂手术。故术后如何减少肝功能不全成为首先关注的问题。研究已证实，骨髓间充质干细胞（BMSCs）能改善肝硬化患者肝功，其在改善离体肝切除自体肝移植术后肝功能有较好的前景。研究目的及理论意义创建了离体肝切除自体肝移植手术动物模型，为相关基础研究提供平台。通过模型大鼠经门静脉移植BMSCs入肝后，动态观察BMSCs在肝脏分布情况，检测术后不同时间点肝功能、肝细胞凋亡情况和凋亡相关蛋白，明确BMSCs是否对离体肝切除自体肝移植术后大鼠具有肝功能保护作用，并初步探讨可能的机制，为临床上离体肝切除自体肝移植围手术期处理提供参考价值。研究方法(1)培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)并进行鉴定。(2)采用四氯化碳注射法建立SD大鼠肝纤维化模型。(3)建立SD大鼠离体肝切除自体肝移植动物模型，分别取正常组SD大鼠与轻度肝纤维化SD大鼠进行实验，根据是否移植BMSCs，各将大鼠随机分为假手术组(n=30)，BMSCs移植组(n=30)和对照组(n=30)。(4)分别于大鼠离体肝切除自体肝移植术后或假手术组术后12h、24h、48h、72h、168h时间点处死各组大鼠，观察大鼠术后早期存活率，检测大鼠肝功指标；在正常大鼠中，观察BMSCs在肝脏动态分布情况，采用TUNEL法检测各组间不同时间点的肝细胞凋亡情况，采用wb法检测凋亡相关蛋白TGF-β1、bcl-2、bax在术后24h、72h、168h的相对表达情况；在轻度纤维化大鼠中，采用wb法检测了凋亡相关蛋白TGF-β1、TGF-βR1、TGF-βR2、bcl-2、bax、p38、p-p38表达情况。结果成功建立肝纤维化大鼠模型和离体肝切除自体肝移植动物模型，顺利培养大鼠BMSCs并鉴定。在正常SD大鼠中，BMSCs移植组术后大鼠死亡率低于对照组，术后移植BMSCs的大鼠肝组织中均有GFP表达，并随时间推移表达增多，BMSCs移植组术后12h、24h、48h、72h时间点ALT、AST等肝功指标明显好于对照组，肝细胞凋亡率低于对照组(p<0.05)，BMSCs移植组TGF-β1、bax水平较对照组减少，bcl-2较对照组增高，其中在术后24h、72h时间点bax下调、bcl-2上调有显著性差异(p<0.05)，而TGF-β1在24、72h无显著性差异。在肝纤维化SD大鼠中， BMSCs移植组术后12h、24h、48h、72h ALT、AST等肝功能指标明显好于对照组(p<0.05)，对该组进一步检测发现BMSCs移植组TGF-β1、TGF-βR1、p38、p-p38、bax在12h、24h、48h、72h时间点较对照组显著下降(p<0.05)，而bcl-2在12h、24h、48h、72h时间点明显升高(p<0.05)。结论(1)创建了纤维化大鼠离体肝切除自体肝移植术的动物模型，为相关研究提供稳定的动物模型。(2)BMSCs直接通过门静脉注射移植入肝，明显改善离体肝切除自体肝移植大鼠术后肝功能，提高术后大鼠存活率。(3) BMSCs可能通过TGF-β1/TGF-βR1、p38相关的通路，最终改变bcl-2/bax比值，进而减少肝细胞凋亡，改善术后肝功能