论文部分内容阅读
目的:观察本实验组构建的鼠IFN-λ2(mIFN-λ2)重组腺病毒载体(Ad-mIFN-λ2)感染小鼠后能否成功表达,并通过重组腺病毒载体Ad-mIFN-λ2感染至LA795肺腺癌细胞荷瘤鼠内,研究mIFN-λ2对LA795荷瘤鼠肿瘤细胞增殖的影响及其诱导凋亡、激活机体免疫反应的机制。
方法:采用已构建成功的重组腺病毒载体Ad-mIFN-λ2感染至小鼠体内,采用Westernblot检测mIFN-λ2基因在小鼠组织内的表达情况,通过小鼠的体重增长情况观察其对小鼠生长的影响;进一步实验将Ad-mIFN-λ2感染至小鼠肺腺癌细胞LA795的荷瘤鼠内,通过绘制肿瘤生长曲线观察肿瘤细胞的生长速度,21天后处死小鼠,取小鼠瘤体、脾脏、骨胳肌等组织,HE染色显微镜下观察小鼠瘤体组织、脾脏组织内的病理改变,采用RT-PCR检测小鼠骨骼肌组织及肿瘤组织内mIFN-λ2的基因表达,Westernblot检测小鼠肿瘤组织mIFN-λ2的蛋白表达,Tunel凋亡检测试剂盒检测小鼠肿瘤组织的细胞凋亡,流式细胞检测术检测小鼠脾脏免疫细胞NK细胞、CD4+细胞、CD8+细胞的改变。
结果:小鼠感染Ad-mIFN-λ2后在蛋白水平上mIFN-λ2表达量明显高于对照组,且小鼠生长基本正常:进一步的肿瘤体内实验研究,肿瘤生长曲线示:PBS组感染后14d、21d与Lacz组无明显统计学差异,前两者与Ad-mIFN-λ2组相比有明显差异(p<0.01),且Ad-mIFN-λ2组小鼠瘤体组织中央呈囊样改变,脾脏增大,病理检查显示此组肿瘤坏死增多,脾脏中多核巨细胞增多,白髓增宽;RT-PCR结果:Ad-mIFN-λ2感染组骨骼肌组织及肿瘤组织出现明显约220bp的mIFN-λ2基因的条带;Westernblot示Ad-mIFN-λ2组出现明显27kDa的mIFN-λ2蛋白的条带;Tunel凋亡检测提示Ad-mIFN-λ2组凋亡明显高于PBS组与Lacz组(p<0.001),流式细胞检测示:Ad-mIFN-λ2组NK、CD8+、CD4+细胞数明显高于PBS组与Lacz组(p<0.01)。
结论:本实验组构建的重组腺病毒载体Ad-mIFN-λ2在小鼠体内感染后能够稳定表达,且不影响其正常生长;Ad-mIFN-λ2体内感染对肺LA795腺癌的生长有一定的抑制作用,可能主要通过促进肿瘤细胞凋亡或增强细胞免疫应答等途径发挥作用。