背景癌症是目前全世界导致人类死亡的第二大原因，目前临床上治疗肿瘤的重要手段仍是放、化疗。众所周知，大部分的放、化疗对骨髓都有一定的抑制作用，治疗中常导致严重外周血白细胞的降低，致使机体免疫功能降低，病人继发感染，最终导致治疗失败。因而，防治骨髓抑制，加快放、化疗后机体免疫系统的重建，是保证恶性肿瘤放、化疗效果的关键。随着造血干细胞的分离纯化技术进展，CD34⁺造血干细胞是目前所研究的最早期的造血细胞，它可以在细胞内外环境的刺激下，在细胞因子的作用下向各系分化成熟为功能细胞。千金藤碱（cepharathine）是一种双苄基异喹啉类生物碱，是从防己科千金藤属植物中提取分离出来的，经成盐为盐酸千金藤碱（Cepharathine Hydrochlorid，CH），其具有消炎、抑菌、调节免疫功能等作用，本研究模拟临床肿瘤病人体内环境，在体内造成白细胞降低模型，证实了盐酸千金藤碱的升高白细胞效果，并从体内外两个方面探讨了升白细胞的机制与促进骨髓CD34⁺造血干细胞增殖的关系，为盐酸千金藤碱的进一步开发研究提供了理论依据。方法实验采用动物移植性肿瘤肝癌H22细胞皮下移植模型，观察不同浓度的CH预防和治疗环磷酰胺造成的白细胞降低的药效学实验。体外实验采用分离纯化骨髓有核细胞，在抑制干细胞分化的同时加入不同浓度的CH进行培养，测定CH在体外对骨髓CD34⁺造血干细胞增殖的影响；体内实验用环磷酰胺（cyclophosph-amide，CTX）造成荷H₂₂细胞小鼠白细胞降低模型，观察不同浓度的CH预防和治疗由CTX所致白细胞减少小鼠骨髓有核细胞（Bone Marrow Cells，BMC）及CD34⁺造血干细胞增殖和对肿瘤生长的影响。结果1．体外对骨髓CD34⁺造血干细胞增殖的影响不同剂量的CH与骨髓有核细胞共同培养5天，结果对照组为（49.38±1.12）％、40ng／mlCH为（83.67±2.72）％、20ng／ml CH（64.94±3.77）％、10ng／ml CH组为（53.58±1.72）％、50ng／ml G-CSF组为（61.84±2.51）％，各给药组与阴性对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05），CH大剂量组与G-CSF组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。2．药物在体内对白细胞的影响2．1对化疗所致白细胞降低的预防作用：结果发现停药后24h白细胞计数分别为：荷瘤对照组为（10.93±1.34）×10⁹、30mg／kgCTX组为（1.83±0.31）×10⁹、30mg／kgCTX+20mg／kgCH组为（4.76±0.56）×10⁹、30mg／kgCTX+10mg／kgCH组为（4.03±0.58）×10⁹，CTX组白细胞降至最低。不同浓度的CH组白细胞计数与CTX组相比差异有统计学意（P＜0.05）。停药后第6d，给药组白细胞均恢复正常，各组白细胞计数分别为（9.79±1.76）×10⁹、（3.88±0.59）×10⁹、（9.83±1.24）×10⁹、（8.99±1.30）×10⁹，给药组的白细胞计数与CTX组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。2．2对化疗所致白细胞降低的治疗作用：不同药物处理后白细胞计数结果发现50μg／kgG-CSF组白细胞于给药第3d恢复正常，各给药组白细胞计数分别为：荷瘤组（9.80±1.50）×10⁹、30mg／kgCTX组为（2.35±0.51）×10⁹、20mg／kgCH组为（5.48±0.88）×10⁹、10mg／kgCH组为（4.38±0.67）×10⁹、50μg／kgG-CSF组为（10.64±2.70）×10⁹，第5d达高峰，依次为（9.48±1.72）×10⁹、（3.98±0.54）×10⁹、（9.49±1.00）×10⁹、（7.28±0.47）×10⁹、（19.48±1.75）×10⁹，从数据可以看出，CH大剂量组白细胞已经恢复正常。各给药组于给药后第6d全部恢复正常，分别为：（9.61±1.46）×10⁹、（4.91±0.63）×10⁹、（10.01±1.30）×10⁹、（9.09±1.42）×10⁹、（17.06±1.35）×10⁹，各给药组与CTX模型组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。3．体内对骨髓有核细胞数及CD34⁺造血干细胞增殖的影响3．1预防用药对小鼠骨髓有核细胞数及CD34⁺造血干细胞增殖的影响：药物处理后骨髓有核细胞计数结果分别为：荷瘤对照组为（7.79±0.90）×10⁶、30mg／kg CTX组为（1.53±0.30）×10⁶、30mg／kgCTX+20mg／kgCH组为（4.52±0.59）×10⁶、30mg／kgCTX+10mg／kg CH组为（3.63±0.54）×10⁶，用药组与CTX组相比差异有统计学意义（P＜0.05）；骨髓细胞悬液上流式细胞仪检测CD34⁺细胞表达情况，各组结果为：（4.99±1.38）％、（1.67±0.72）％、（20.63±4.36）％、（11.47±2.59）％。用药组与CTX组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。3．2治疗用药对骨髓有核细胞数及CD34⁺造血干细胞增殖的影响：给药结束后骨髓有核细胞计数分别为：对照组为（7.61±1.25）×10⁶、30mg／kg CTX组为（1.59±0.37）×10⁶、20mg／kgCH组为（4.92±0.68）×10⁶、10mg／kg CH组为（3.63±0.69）×10⁶、50μg／kgG-CSF组为（7.10±0.66）×10⁶。CD34⁺造血干细胞阳性率分别为：（5.40±1.22）％、（1.66±0.38）％、（58.66±8.19）％、（37.39±3.95）％、（18.00±4.12）％，用药组与CTX组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。4治疗用药辅助化疗作用：肿瘤称重结果：对照组为（2.11±0.29）g、30mg／kgCTX组为（1.20±0.20）g、20mg／kgCH组为（0.93±0.14）g、10mg／kg CH组为（0.79±0.14）g、50μg／kg G-CSF组为（1.10±0.26）g，除荷瘤组外其余组的抑瘤率分别为43.1％、55.9％、62.6％、47.9％。用CH组与CTX组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论1．CH具有明显的防治肿瘤化疗引起的白细胞降低作用。2．CH在体内和体外均可促进骨髓CD34⁺造血干细胞的增殖，这可能是CH升高白细胞的重要机制之一。3．CH与化疗药同时应用具有明显的增效作用。提示CH具有降低化疗毒性，增强化疗疗效的作用。为今后对CH的进一步深入研究及临床应用提供了科学的理论依据。