MEHP诱导大鼠C6神经胶质瘤细胞向少突胶质细胞分化

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目的: DEHP是运用最广泛的增塑剂,MEHP是其在体内的活性代谢产物。近年来,大量流行病学调查资料显示婴幼儿与儿童的DEHP、MEHP的暴露水平高于成人。有实验研究表明MEHP可以影响神经元的增殖分化,流行病学调查也显示高水平暴露于DEHP的母亲产下的婴儿神经反射情况欠佳。为了探讨MEHP是否对神经胶质细胞产生毒性作用,本实验采用C6神经胶质瘤细胞模型研究MEHP对神经胶质细胞分化的影响。方法:培养未分化的大鼠C6细胞;将未分化的C6细胞置于不同浓度的MEHP(100mg/L、50mg/L、10mg/L、1mg/L)低血清培养基中进行培养,培养时间为24小时、48小时,同时设立对照组(0.1%DMSO);采用MTT及流式细胞术检测不同浓度的MEHP对C6细胞活性的影响及是否发生凋亡;采用倒置显微镜观察各组细胞形态变化,统计阳性延展细胞百分数;采用免疫荧光和免疫印迹检测各组MBP、GFAP、PPARγ蛋白表达水平。结果:1. MTT及流式细胞术检测显示,MEHP影响C6细胞活性,抑制细胞生长,但在该剂量及作用时间范围内不引起凋亡。2.倒置显微镜观察各组细胞形态,对照组大部分未分化C6细胞胞体呈长梭形、有的呈多角形,胞体有短而粗的突起,而暴露于MEHP的实验组与对照组相比,细胞胞体较光滑、变得更圆,两端突起变得更细更长;随着MEHP浓度和作用时间的增加,阳性延展细胞数增多。3.免疫荧光和免疫印迹结果显示, PPARγ、GFAP的表达无明显差异,而随着MEHP浓度的增加和作用时间的增加,细胞MBP的表达增加。结论:MEHP诱导大鼠C6神经胶质瘤细胞向少突胶质细胞分化。
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