论文部分内容阅读
石墨烯(graphene,G)是由单层碳原子以SP2杂化形式存在的二维(2D)蜂窝状晶格结构,氧化石墨烯(graphene oxide,GO)是石墨烯的一种衍生物,其表面含有的丰富含氧官能团和π-π堆积等作用力,为其进一步功能化和与生物大分子非共价结合提供充足的活性位点,有望成为理想的水溶性药物和酶的载体。本文合成了GO并进行表征和功能化,对GO与辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)的相互作用及其生物相容性开展了一系列的研究,主要包括以下几个方面:1、氧化石墨烯的制备和表征利用控制氧化剂用量的改进Hummers法和中低温超声辅助法合成GO。通过XRD和AFM表征发现,控制石墨和KMnO4用量比为1:10的情况下,合成的GO颗粒最小。进一步采用循环伏安曲线、紫外可见吸收光谱(UV-Vis)、傅里叶红外光谱(FT-IR)、荧光光谱(fluorescence spectrum)、扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)等对石墨和GO进行了表征。结果表明GO具有明显的二维平面结构,在水溶液中能够均匀地分散,纵向尺寸在1.5nm左右,接近单原子层厚度,同时其表面存在褶皱结构,有利于自身结构稳定,该结构的存在也为后期研究GO与蛋白的相互作用提供了可能。2、氧化石墨烯固载酶及其性能评价以GO为载体,研究了HRP、GOD与GO的相互作用,合成了HRP/GO和GOD/GO并评价固定化酶的性能。AFM表征显示HRP和GOD能与GO有效结合。利用紫外可见吸收光谱法评价固定化酶催化活性时发现GO对底物、酶和产物均有不同程度的吸附。研究发现顺序注射-阀上实验室-化学发光系统是评价HRP/GO和GOD/GO催化活性的可靠平台,并将其应用于葡萄糖的检测,检出限为0.05μmol L-1。3、氧化石墨烯的改性及其细胞毒性研究对GO进行功能化改进得到GO-COOH,并将氨基聚乙二醇修饰在GO-COOH表面,形成聚乙二醇功能化的GO(PGO)。Zeta电位表明三者在水中均能稳定存在但略有不同,稳定性依次为GO-COOH>GO>PGO。观察了GO、GO-COOH和PGO在水、PBS缓冲溶液和细胞培养液分散系中不同时间的稳定性,结果发现,PGO在三种分散剂中稳定性最好。在此基础上,我们考察了GO和PGO对于肝细胞的毒理学性质,结果表明,PGO对肝细胞的毒性最小,具有良好的生物相容性。