芪竹方中单体薯蓣皂苷及莪术醇对人胃癌细胞MGC-803抑制作的研究

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目的和意义:胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,是严重威胁人民健康的疾病。寻找有效治疗胃癌的药物和方法是目前最迫切的研究课题。研究表明胃癌的发生是一个多阶段、多因素的复杂发展过程,其发生和发展不仅与增殖和分化异常有关,而且与细胞凋亡基因和蛋白的调节机制紊乱有关。探索诱导胃癌细胞凋亡的策略成为近年来研究的重点。中医药疗法是胃癌治疗领域中的重要部分,中药对于降低胃癌术后复发率、减轻放化疗不良反应、延长患者生存期、改善患者的生存质量有着重要的意义。南京中医药大学单兆伟教授治疗胃肠道肿瘤的验方芪竹方,临床研究发现该方具有较好的抑制肿瘤生长、减少术后复发作用,但其作用机理尚未完全全明确。我们选取芪竹方中滋阴养胃的扶正主药玉竹,破血散结的抗癌主药我术。通过研究两药的主要有效成分薯蓣皂苷与莪术醇对人胃癌细胞MGC-803的体外抑制作用及机制,探索芪竹方抑制胃癌的作用机制,分离活性单体,为新型抗癌药物的研发提供新的策略和思路。研究方法:体外培养人胃癌细胞MGC-803。通过MTT法观察芪竹方中单体薯蓣皂苷及莪术醇对MGC-803增殖抑制作用,并考量其量效和时效关系;光镜和电镜下观察药物作用后,细胞形态学变化;分光光度法检测芪竹方中单体薯蓣皂苷及莪术醇对MGC-803细胞Caspase-9表达的影响;RT-PCR法检测薯蓣皂苷及莪术醇对MGC-803细胞端粒酶活性的影响。结果:1.薯蓣皂苷呈剂量和时间依赖性地抑制MGC-803细胞增殖,24h1C50为8.15μg/ml,48hIC50为4.05μg/ml;莪术醇对MCC-803细胞抑制作用表现明显的时-效和量-效关系,24h IC50为151.45gg/ml,48h IC50为102.50μg/ml。2.MGC-803细胞具有典型的肿瘤细胞形态和超微结构特征;薯蓣皂苷、莪术醇及两者配伍作用MGC-803细胞后,细胞均表现典型的凋亡改变:微绒毛结构减少甚至消失,胞质浓缩,染色质凝聚、边集,核固缩,裂解,凋亡小体形成等。3.薯蓣皂苷及莪术醇均能提高MGC-803细胞Caspase-9活性,活化作用表现浓度依赖性。4.薯蓣皂苷及莪术醇均能抑制MGC-803细胞端粒酶活性,抑制作用表现量-效关系。5.薯蓣皂苷与莪术醇配伍使用,在对MGC-803细胞增殖抑制、活化Caspase-9及抑制端粒酶活性等方面表现出较单药使用更强的效用。结论:薯蓣皂苷、莪术醇是芪竹方的有效活性成分;两单体及配伍均能明显抑制人胃癌细胞MGC-803增殖,诱导其凋亡;活化Caspase-9和抑制端粒酶活性参与了诱导凋亡的作用机制;薯蓣皂苷与莪术醇配伍,较单药使用,能产生更强效用。
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