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细胞的种种功能活动受到复杂的信号转导通路的调控,精细调节的信号转导,是正常生命活动的前提,如果信号转导异常,即可导致病理过程。EGFR和P16基因在喉癌细胞信号转导中起重要作用,同时,在喉癌细胞中呈现EGFR高表达和P16基因的突变或纯合子的缺失。因此,针对二基因,我们从信号转导的角度进行信号转导干预治疗(interference therapy in signal transduction)的研究,希望为喉癌个体化基因治疗寻找一个新的突破口。 为了研究与EGFR、P16有关的喉癌细胞信号转导干预治疗的分子机理、喉癌细胞的细胞周期变化、细胞凋亡、一般形态结构及超微结构变化等,我们以重组腺病毒为载体,构建了EGFR反义的cDNA (AS)互补结合EGFR基因功能区,从而阻断EGFR的mRNA的合成及蛋白的表达,达到抑制喉癌细胞生长的作用,在此过程中,一起构建EGFR正义cDNA (S),并研究其功能。同时,我们引入外源性的p16β基因,转移至喉癌细胞内,将肿瘤细胞阻滞在G1期,从而抑制肿瘤细胞的生长。与此同时,我们建立了人喉癌Hep-2细胞的裸鼠动物模型,将裸鼠随机分组后,分别进行重组腺病毒携带的p16β、AS、S、AS+P16基因、空载体和PBS对照的直接肿瘤注射治疗,观察治疗过程中肿瘤体积变化,目的基因的蛋白表达或已表达蛋白的抑制,用SPSS11.05软件进行统计学处理,我们得到的结果如下: 1.本研究成功构建了EGFR cDNA 1032bp片段的反义mRNA表达重组腺病毒;同时构建了相应1032 bp片段的正义mRNA表达重组腺病毒作为对照,并制备了高滴度的重组腺病毒颗粒。 2.本研究成功构建了p16β全长cDNA的重组腺病毒并制备了高滴度的重组腺病毒颗粒。 3.携带目的基因的重组腺病毒感染Hep-2培养细胞后目的基因高效转移到细胞并在细胞内表达(P16)或抑制细胞表达(EGFR)。 4.通过对携带目的基因的重组腺病毒感染Hep-2培养细胞的MTT实