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目的:研究抗CD20单克隆抗体人源化改造后在动物体内的药代动力学(PK)、药效动力学(PD)及免疫原性特征变化,同时基于人源化抗CD20单克隆抗体(anti-CD20zumab)而建立不同方法学,并对其进行系统比较。方法:采用夹心酶联免疫吸附法(ELISA)研究anti-CD20zumab在食蟹猴体内的PK行为;采用流式细胞术(FCA)研究anti-CD20zumab在食蟹猴体内的PD行为,并进行PK/PD相关性分析;采用桥式酶联免疫吸附法(Bridging-ELISA)研究anti-CD20zumab在食蟹猴和大鼠体内的免疫原性,并进行PK/免疫原性相关性分析;建立三种基于不同捕获抗体(与anti-CD20zumab不同位点进行结合)的夹心ELISA法和一种基于Wi12-S细胞的竞争FCA法对食蟹猴血浆中anti-CD20zumab进行定量分析,并对四种方法进行系统比较。结果与讨论:1、食蟹猴单次vd anti-CD20zumab低、中、高三个剂量之比为1:3:10,低、中和高剂量组Cmax之比为1:2.7:10.7,AUC(0-t)之比为1:2.9:13.7,说明在10 mg·kg-1～30 mg·kg-1剂量范围内anti-CD20zumab在食蟹猴体内基本表现为线性药代动力学特征;剂量增至l00mg·kg-1时,药物暴露水平呈非线性增加,末端半衰期明显延长,系统清除率降低,呈现出一定的非线性药代动力学特征。2、食蟹猴多次vd30mg·kg-1 anti-CD20zumab与对照品Rituximab后,两组表现出相似的药代动力学特征,平均血药浓度与各主要药代参数均无统计学差异;anti-CD20zumab和Rituximab在末次给药后绝大部分动物会出现不同程度的药物蓄积,但也有少部分动物末次给药后的药物暴露显著低于首次给药;anti-CD20zumab与Rituximab末次给药后动物个体间药代参数的变异系数较首次给药显著增大。3、给药后30min,各组B细胞表面CD20抗体结合率均高于99%,B细胞开始清除;给药后1d,B细胞清除到极值,B细胞测定值均低于0.2%。4、低、中剂量组给药后7d或14d部分动物B细胞已经开始恢复,而高剂量组给药后28dB细胞均未恢复,呈现出一定的剂量-效应关系。5、食蟹猴多次vd30mg.kg-1 anti-CD20zumab 与 Rituximab 后,anti-CD20zumab 对食蟹猴体内 B 细胞的清除作用显著强于Rituximab;Rituximab组的动物B细胞清除反应个体差异较明显,部分个体随给药次数增加对药物出现耐药性。6、食蟹猴多次vd 30mg.kg-1 anti-CD20zumab和Rituximab后,部分动物体内产生抗药抗体(ADA),动物体内开始产生ADA的时间约为初次给药14天以后,两组样品的抗药抗体阳性率分别为15.6%与37.5%,结果提示食蟹猴体内Rituximab的免疫原性强于anti-CD20zumab,其符合人源化改造的目的指向性。7、大鼠多次iv 20mg·kg-1 anti-CD20zumab和Rituximab后,均未检测到有抗药性抗体的产生,提示两种药物在大鼠体内的免疫原性均很低;未能直接从结果上看出人源化改造后在大鼠体内免疫原性的提高,其原因可能是大鼠对该分子的免疫容受性较高且考察动物数较少。8、PK/PD相关性分析结果表明,食蟹猴体内B细胞的恢复会直接影响血浆中anti-CD20zumab浓度的变化。9、PK与免疫原性相关性分析结果表明,食蟹猴体内ADA产生也会直接影响血浆中anti-CD20zumab浓度的变化。10、四种方法的各验证参数均满足生物技术药物PK研究要求,且均可用于食蟹猴血浆样品中anti-CD20zumab的定量分析,因此,为该类药物PK研究提供了不同定量分析方法。