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雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)属卫矛科雷公藤属植物,是一种珍贵的传统药用植物,在我国已有700多年的利用历史,药理作用广泛,主要分布于我国的福建、浙江、安徽、江西、台湾等省份。植物内生真菌普遍存在于各种健康植物的组织或器官中,在与宿主植物的长期生活中互相影响形成互利共生体。在植物微生态系统中,内生真菌长期生活在植物体内,对宿主植物的生理生长产生重要影响,相关研究表明,植物内生真菌具有益生长、增强宿主植物抗逆性、增强宿主植物代谢等多种生物学作用,有的内生真菌还能够合成与宿主植物相同或相近的次生代谢产物。目前,雷公藤的来源主要以采挖野生资源为主,而自然界中雷公藤资源的数量有限,这就导致雷公藤野生资源日益减少,对当地的生物多样性和生态平衡造成严重影响。本文对产雷公藤甲素内生真菌的分离、雷公藤内生真菌间的交互作用、大孔吸附树脂对内生真菌合成雷公藤甲素的影响、雷公藤内生真菌与内生细菌的相互作用等内容进行了研究,以期加深对雷公藤及其内生真菌的了解,寻求一条生产雷公藤甲素的有效途径,保护雷公藤野生资源。本文主要内容如下:(1)雷公藤内生真菌的分离鉴定。本研究对雷公藤内生真菌进行分离、纯化、液体培养、发酵液分析检测,并对分离到的内生真菌进行筛选,得到一株产雷公藤甲素的活性菌株NS-1。根据真菌形态特征结合分子生物学手段,初步确定该菌株为镰刀菌属。(2)内生真菌互作对雷公藤甲素合成的诱导作用研究。本研究通过建立内生真菌交互共培养体系,筛选出合成雷公藤甲素能力最强的优势组合NS-1+NS-8,其雷公藤甲素合成量是单独培养NS-1的1.56倍。后将NS-8制备成不同的粗提物(发酵液P、菌丝体粗提物Q),添加到指数生长末期的NS-1中,研究NS-8对NS-1甲素合成的影响。结果发现,发酵液P极大地促进了 NS-1对雷公藤甲素的合成,胞外雷公藤甲素的积累在第7天达到最大值0.2039μg/ml,为对照组的4.2倍;菌丝体粗提物Q在诱导实验中不仅没有促进NS-1的生长,反而一定程度上抑制其正常生长,实验组NS-1的生物量较CK偏小,糖耗速率也较CK偏低,胞外甲素的产量也明显低于CK,胞内甲素的量与CK相近。(3)大孔吸附树脂对雷公藤内生真菌合成雷公藤甲素的影响。本研究表明利用大孔吸附树脂对NS-1发酵培养体系中的TPL进行吸附,能够明显促进NS-1合成TPL的能力。结果显示,在NS-1液体培养第4天,加入2.0g NKA-9型树脂,吸附30h后收获对TPL的吸附效果最好。(4)通过将雷公藤内生真菌NS-1与分离到的23株雷公藤内生细菌共培养,发现内生细菌LY-3对NS-1甲素合成具有较好的促进作用,两者共培养所合成的雷公藤甲素是单独培养NS-1所合成甲素量的1.41倍。将LY-3制备成不同的诱导子(活性诱导子H、失活诱导子S),添加到指数生长末期的NS-1中,研究LY-3对NS-1甲素合成的影响。结果表明,活性诱导子H的加入促进了雷公藤甲素的积累,在加入后的24h培养液中TPL的积累量达到最大值0.0069ug/ml,为对照组的1.41倍;加入失活诱导子S的实验组,对雷公藤甲素积累的促进效果并不显著,同样在加入后的24h达到最大值,但其最大值0.0051 ug/ml仅为对照CK的1.04 倍。