供者淋巴细胞输注治疗小鼠H22肝癌皮下移植瘤的实验研究

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目的探讨供者淋巴细胞输注(DLI)及其联合化疗(氟尿嘧啶,5-FU)对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的治疗作用。方法昆明(KM)小鼠随机分为A、B、C、D四组,右腋下接种H22肝癌细胞建立皮下移植瘤模型。其中C、D组以BALB/C小鼠为供鼠,接种瘤细胞前先行预处理,预处理方案为DST+CP+DST:每只KM小鼠d0经尾静脉注入5×107供鼠脾细胞(供者特异性输注,DST),d2腹腔注射环磷酰胺(CP)200mg/kg,d3再次尾静脉注射供鼠脾细胞3×107。A组(荷瘤对照组):接种瘤细胞后不予任何特殊处理; B组(化疗组):接种后第3天开始化疗,5-FU20mg·kg-1·d-1腹腔注射,连续用药5天; C组(DLI组):d0开始预处理,d11接种瘤细胞,d14、d21、d28尾静脉注射供鼠脾脏淋巴细胞,细胞数分别为0.5×107 /只、0.5×107 /只、1×107 /只; D组(联合组):d0开始预处理,d4接种瘤细胞,d711化疗,方案同B组,d14、d21、d28行DLI,细胞数同C组。混合淋巴细胞反应(MLR)检测C、D组免疫耐受状态;比较各组小鼠生存期、抑瘤率、瘤体病理;流式细胞仪(FCM)检测各组小鼠外周血T淋巴细胞亚群;ELISA检测各组小鼠血清IL-2水平;免疫组织化学法观察正常BALB/C小鼠脾脏CD34+造血干细胞。结果1.C、D组KM小鼠脾细胞对BALB/C小鼠脾细胞的MLR反应性明显降低; 2.A、B、C、D组生存时间分别为(16.4±2.5)d、(26.3±3.1)d、(23.3±3.2)d和(33.7±5.3)d, B、C组生存时间长于A组(P <0.01),D组长于其余三组(P <0.01); 3. B、C、D各组抑瘤率分别为61.3%、34.7%和89.5%; 4.C、D两组小鼠外周血CD3+、CD4+T细胞百分比较A、B组增多(P<0.05),CD4+/CD8+比值及IL-2水平明显高于A、B组(P<0.05); 5.瘤体组织病理学观察见C、D组间质内大量炎性细胞浸润; 6.正常BALB/C小鼠脾脏脾小体周边可见少量成簇状分布的CD34+造血干细胞。结论1.DST+CP+DST方法可以在KM小鼠诱导出对BALB/C小鼠的特异性免疫耐受状态。2.DLI与化疗具有协同作用,两者联合应用可以明显抑制小鼠H22肝癌皮下移植瘤瘤体生长、延长小鼠的生存时间。3.DLI可以增强H22肝癌皮下移植瘤小鼠机体的免疫功能。4.供者脾细胞因其含有大量异基因淋巴细胞和少量造血干细胞,输入肿瘤机体后可诱导有效的移植物抗肿瘤效应(GVT),杀灭残存的肿瘤细胞,是一种潜在可行的实体瘤细胞过继免疫治疗方法。
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