论文部分内容阅读
本试验研制中药病毒克颗粒剂并探讨其抗鸡新城疫病毒(NDV)活性，为临床应用提供理论依据。为此进行一系列试验并取得如下结果：
1.病毒克颗粒剂的研制：以黄芩甙含量和浸膏得率为检测指标，选择提取时间、提取次数和醇沉时乙醇浓度3个因素，按L9(34)正交表优选最佳提取工艺条件。用薄层色谱法(TCL)对制剂中的黄连、金银花进行定性鉴别，紫外分光光度法测定黄芩甙含量，建立病毒克颗粒剂的质量标准。以黄芩甙含量及颗粒外观颜色的变化为指标，考察温度、湿度、光照对该制剂稳定性的影响。
病毒克颗粒剂的最佳提取工艺条件为用10倍量的水煎煮2次，每次2h，醇沉时乙醇的浓度为55％。TCL能检出黄连和金银花，黄芩甙在1.0～5.0μg范围内呈良好的线性关系r=0.9992(n=5)，平均回收率为97.73％，RSD为0.76％(n=5)；该法准确、可靠、重现性好，可作为本品的质量控制标准。在强光照射条件下黄芩甙含量未发生明显变化，但环境湿度愈高，黄芩甙含量及外观颜色变化愈明显；颗粒剂的有效期为3年。
2.病毒克颗粒剂具有良好的抗鸡NDV活性：采用细胞学技术，通过细胞病变抑制法和MTT比色法检测病毒克颗粒剂在鸡胚成纤维细胞(CEF)中对NDV增殖的影响；以病毒唑为对照药品，通过血凝效价测定评价该制剂在鸡胚中对NDV的抑制作用；采用人工感染防治试验和临床治疗试验，对其体内抗NDV活性和治疗效果进行评价。
病毒克颗粒剂对CEF的半数中毒浓度(TC50)为61.35mg/ml，抗NDV的半数有效浓度(EC50)为3.2mg/ml，治疗指数(TI)为19.2；对NDV有预防和中和作用，并存在明显的量效关系(P＜0.01)，感染后9小时以内给药能有效地抑制NDV的复制。对鸡胚的最大无毒剂量大于700mg，预防组、治疗组的HA效价均极显著低于攻毒对照组(P＜0.01)，明显推迟NDV引起鸡胚死亡时间。病毒克颗粒剂高、中剂量组的疗效高于散剂组(p＜0.01)，而低剂量组的疗效与散剂组相当(P＞0.05)。治疗临床发生的典型和非典型性鸡新城疫有效率高于95％，极显著高于对照组(P＜0.01)。病毒克颗粒剂对NDV在鸡胚成纤维细胞中和鸡胚中的增殖具有明显的抑制作用，对鸡新城疫的疗效优于同剂量散剂。
3.病毒克颗粒剂能显著增强鸡的免疫功能：海兰褐雏鸡随机分成预防组、治疗组和对照组，NDV攻毒前后按设定程序给于病毒克颗粒剂。分别于攻毒后7、14、21天测定各组ND-HI抗体和免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的总量；17天各组红细胞IC花环率、C3b受体花环率和20天免疫器官指数(法氏囊、胸腺、脾脏)等指标，观察病毒克颗粒剂对雏鸡免疫功能的影响。
病毒克颗粒剂治疗组和预防组ND-HI效价和免疫球蛋白总量均呈上升趋势，在14、21天时治疗组的ND-HI效价显著高于对照组。在7天时，预防组和治疗组的IgA、IgM极显著高于对照组(P＜0.01)。用药组C3b受体花环率、IC花环率均极显著高于对照组(P＜0.01)。治疗组胸腺指数显著高于对照组(P＜0.05)；预防组脾指数显著低于对照组(P＜0.05)。病毒克颗粒剂对ND患鸡的免疫功能具有显著的增强作用。
4.病毒克颗粒剂显著改善新城疫患鸡的肝肾功能：海兰褐蛋雏鸡随机分成阴性对照组、阳性对照组、预防组和治疗组，攻毒前后按设定试验程序给予病毒克颗粒剂。于攻毒后10天各组鸡心脏采血，分离血清测定其生化指标，评价病毒克颗粒剂对新城疫病雏鸡肝肾功能的影响。
预防组和治疗组血清尿素氮、尿酸、肌酐和乳酸脱氢酶的含量极显著低于阳性对照组(p＜0.01)；谷革转氨酶和谷丙转氨酶的含量显著低于阳性对照组(p＜0.05)；γ-谷氨酰转移酶、总蛋白、白蛋白的量显著高于阳性对照组(p＜0.05)；钙的含量极显著高于阳性对照组(p＜0.01)。结果表明病毒克颗粒剂具有明显改善新城疫病鸡肝肾功能的作用。