论文部分内容阅读
目的:通过观察出生前DEHP暴露对子代大鼠摄食和生长发育的影响,检测血清瘦素水平和下丘脑ARC区能量代谢部分相关基因和蛋白的表达水平,探讨出生前DEHP暴露对子代大鼠能量代谢的干扰作用及其作用机制。方法:将64只健康成年SPF级妊娠SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和2、10、50 mg/kg DEHP染毒组,每组16只。于G14～G19,采用灌胃方式进行染毒,染毒容量为10 ml/kg,每日1次。子代大鼠于出生后21天断乳并雌雄分笼饲养至42和70日龄,每个年龄段随机选取雌雄各一只(每组雌雄各8只),股动脉取血后颈椎脱臼处死,取新鲜全脑,根据大鼠脑大脑解剖定位图谱确定ARC区所在的位置并打孔,提取总RNA并逆转录,使用自行设计的48基因芯片RT~2Profiler PCR Array进行实时荧光定量PCR以检测下丘脑ARC区能量代谢相关基因的表达水平;每个年龄段另取雌雄各一只(每组8只,共32只),经心脏多聚甲醛灌注固定后取全脑,根据大鼠大脑解剖定位图谱确定ARC区的空间位置,使用自动震荡切片机切至40μm的切片,采用免疫荧光组织化学技术检测下丘脑ARC区能量代谢相关蛋白NPY和POMC的表达水平;采集的全血分离血清后,使用Luminex液态芯片技术对血清瘦素水平进行测定。结果:(1)雄性大鼠各处理组体重在PND21、PND28、PND35、、PND42、PND49差异具有统计学意义,与对照组相比,2 mg/kg DEHP剂量组PND21体重降低(P<0.05),10 mg/kg DEHP剂量组PND21-PND49体重降低(P<0.05),50 mg/kg DEHP剂量组PND21至PND35和PND49体重降低(P<0.05),其他无差异;雌性大鼠各处理组体重在PND21、PND49、PND56差异具有统计学意义,与对照组相比,2 mg/kg DEHP剂量组PND49、PND56体重升高(P<0.05),10 mg/kg DEHP剂量组PND21体重降低(P<0.05),PND49体重升高(P<0.05),50 mg/kg DEHP剂量组PND21体重降低(P<0.05),其他无差异。(2)雄性大鼠PND35摄食量差异具有统计学意义(F=3.361,P=0.034),与对照组相比,10 mg/kg DEHP剂量组摄食量升高(P<0.05);各处理组PND21、PND28、PND42、PND49、PND56、PND63摄食量均没有统计学差异(P>0.05);雌性大鼠PND35、PND63摄食量差异具有统计学意义,与对照组相比,2 mg/kg DEHP剂量组PND35摄食量升高(P<0.05);2 mg/kg DEHP剂量组PND63摄食量升高(P<0.05);PND21、PND28、PND42、PND56摄食量均没有统计学差异(P>0.05)。(3)青春期雄性大鼠各处理组血清Leptin水平差异无统计学意义(P>0.05)。青春期雌性大鼠各处理组血清Leptin水平差异有统计学意义,与对照组相比,10 mg/kg剂量组血清瘦素水平下调(P<0.05);成年雄性大鼠血清Leptin水平在各DEHP剂量组间差异具有统计学意义(P<0.05),与对照组相比,10 mg/kg剂量组血清Leptin水平下调(P<0.05),2和50 mg/kg DEHP剂量组血清Leptin水平无统计学差异(P>0.05),成年雌性大鼠血清Leptin水平在各剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。(4)对于青春期雄性大鼠,各剂量组Hcrt、Lepr、Cntfr、Cnr1、Insr、Nmbr、Atrn、Ghrl和Grp基因相对表达水平在各剂量组间差异具有统计学意义,与对照组相比,2 mg/kg DEHP剂量组Cntfr基因表达水平上调(P<0.05);2 mg/kg DEHP剂量组Cnr1基因表达水平下调(P<0.05);2 mg/kg和10 mg/kg DEHP剂量组Nmbr基因相对表达水平下调(P<0.05);10 mg/kg DEHP剂量组Hcrt基因相对表达水平上调(P<0.05);10 mg/kg DEHP剂量组Insr、Atrn、Ghrl和Grp基因相对表达水平下调(P<0.05);50 mg/kg DEHP剂量组Lepr基因相对表达水平下调(P<0.05)。对于雌性大鼠,各处理组Npy、Cartpt、Adipor2、Crh、Ghsr基因相对表达水平在各剂量组间差异具有统计学意义,与对照组相比,2和10 mg/kg DEHP剂量组Cartpt基因相对表达水平下调(P<0.05);10 mg/kg DEHP剂量组Npy和Ghsr基因相对表达水平下调(P<0.05);10 mg/kg DEHP剂量组Crh基因相对表达水平上调(P<0.05);50 mg/kg DEHP剂量组Adipor2基因相对表达水平下调(P<0.05)。成年雄性大鼠Npy、Pomc、Prl、Lepr、Insr和Ghrl基因相对表达差异具有统计学意义。与对照组相比,10 mg/kg和50 mg/kg DEHP剂量组Npy基因相对表达水平下调(P<0.05);2、10和50 mg/kg DEHP剂量组Pomc基因相对表达水平下调(P<0.05);Insr基因相对表达水平受到出生前DEHP暴露的影响,表现为与对照组相比,10 mg/kg DEHP剂量组Insr和Ghrl基因相对表达水平下调(P<0.05);50 mg/kg DEHP剂量组基因Prl和Lepr相对表达水平上调(P<0.05)。成年雌性大鼠Gal和Cartpt基因相对表达差异具有统计学意义,与对照组相比,50 mg/kg DEHP剂量组Gal和Cartpt基因相对表达水平上调(P<0.05)。(5)青春期雄性大鼠下丘脑ARC区NPY蛋白表达差异具有统计学意义,与对照组相比,50 mg/kg DEHP剂量组NPY蛋白相对表达上调(P<0.05),2和10 mg/kg DEHP剂量组NPY蛋白相对表达无统计学差异(P>0.05);雌性大鼠NPY蛋白相对表达差异具有统计学意义,与对照组相比,2mg/kg DEHP剂量组NPY相对表达上调(P<0.05),10和50 mg/kg DEHP剂量组NPY蛋白相对表达无统计学差异(P>0.05)。青春期雄性大鼠下丘脑ARC区POMC蛋白相对表达差异具有统计学意义,与对照组相比,2 mg/kg DEHP剂量组POMC相对表达下调(P<0.05),10和50 mg/kg DEHP剂量组POMC蛋白相对表达无统计学差异(P>0.05);雌性大鼠POMC蛋白相对表达差异无统计学意义。成年雄性大鼠下丘脑ARC区NPY蛋白相对表达差异具有统计学意义,与对照组相比,10mg/kg DEHP剂量组NPY相对表达上调(P<0.05),2和50 mg/kg DEHP剂量组NPY蛋白相对表达无统计学差异(P>0.05);雌性大鼠NPY蛋白相对表达差异无统计学意义。成年雄性大鼠POMC蛋白相对表达差异具有统计学意义,与对照组相比,10 mg/kg DEHP剂量组POMC相对表达下调(P<0.05),2和50 mg/kg DEHP剂量组POMC蛋白相对表达无统计学差异(P>0.05);雌性大鼠下丘脑ARC区POMC蛋白相对表达差异无统计学意义。结论:1.出生前DEHP暴露可能影响子代大鼠生长发育,且在不同的发育阶段表现不同,青春前期主要表现为阻碍子代大鼠的生长发育,导致体重降低,青春后期至成年期,主要表现为干扰能量代谢,导致体重成追赶趋势追赶,并对摄食造成一定影响。2.出生前DEHP暴露可能影响子代大鼠血清瘦素水平,通过降低血清瘦素水平,干扰下丘脑其他能量代谢通路信号转导。3.出生前DEHP暴露可能干扰下丘脑ARC区能量代谢相关基因和蛋白的表达,可通过干扰血清瘦素水平,进一步影响下丘脑ARC区POMC基因和蛋白的表达,最终干扰摄食和能量代谢。