论文部分内容阅读
前言 mTOR（mammalian target of rapamycin）蛋白是一种结构与功能保守的蛋白质,是磷脂酰肌醇激酶相关激酶家族成员,具有丝/苏氨酸激酶活性,是调节细胞生长的中心调控因子。mTOR受生长因子、胰岛素、营养物质、ATP等的调节,并通过其下游靶蛋白S6K1、4EBP1调控蛋白质的翻译,促进细胞生长,抑制细胞凋亡,并与肿瘤的发生有关,在一些经原癌基因转化的细胞中,mTOR处于持续的活化状态。mTOR对细胞周期也有调控作用,促进G1期细胞进入S期。此外mTOR在胚胎的早期发育中也起到关键性的作用,因为敲除mTOR基因的小鼠在着床后很快死亡,S6K1和S6K2基因敲除的小鼠多在围产期死亡。但是在胚胎发育中mTOR以及S6K1的具体作用到底是什么,该作用从什么时候开始还不清楚。本实验主要研究受精卵中mTOR、S6K1的表达、分布及作用。从而使我们一方面对mTOR信号途径的生理作用有进一步的认识,另一方面也更加深我们对哺乳动物受精卵早期发育机制的认识。 实验材料 昆明系小白鼠,中国医科大学实验动物部提供 快速微量mRNA提取纯化试剂盒,购于Amersham biosciences公司 RT-PCR试剂盒,购于宝生物（大连）有限公司 免疫印迹分析用抗体: FRAP兔多克隆抗体,p70S6K兔多克隆抗体,购于Santa Cruz公司 HRP标记的羊抗兔IgG购于Santa Cruz公司 化学发光ECL试剂盒购于Piece Biotechuology公司 测活用试剂MgCl2,EDTA,EGTA为国产分析纯,DTT为Promega产品,