背景与目的:近年,国内外对重组水蛭素(recombinant hirudin, rH)—— 一种由65个氨基酸组成的高效、特异的凝血酶抑制剂的研发取得了令人瞩目的进展。本研究组曾对国产rH (N-Ile1-Thr2-r-hirudin) 的药效学和药代动力学进行了较深入的研究,证明该药具有强大的抗凝、抗DIC以及抗动静脉血栓形成作用。本文研究了此种rH的抗大鼠冠状动脉和大脑中动脉血栓形成作用,旨在为rH作为新药开发扩大其适应症提供实验资料。方法:(1)模型制备:仿Bucha及徐理纳等人的方法,采用化学物质FeCl3损伤血管内膜从而制备大鼠冠状动脉或大脑中动脉血栓。动物麻醉后,手术暴露冠状动脉前降支及大脑中动脉,将吸有FeCl3的定量滤纸片贴于所要形成血栓的血管表面,持续一定时间,以诱发血栓形成。(2)指标测定及药理活性评价:大鼠冠状动脉血栓形成实验中,分时效关系研究及量效关系研究两部分进行,FeCl3持续贴于血管表面1小时,后静脉注射1%伊文思蓝溶液2ml/kg,根据Bucha方法对心肌缺血面积进行评分、测定左室伊文思蓝含量、ECG变化及心肌超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,依左室伊文思蓝含量计算给药后心肌缺血抑制百分率;大鼠大脑中动脉血栓形成实验中,进行量效关系研究,FeCl3持续贴于血管表面30分钟,术后4小时检查不同剂量给药组大鼠行为学改变,24小时测定脑梗塞面积,并计算脑梗塞面积抑制百分率。以上两种血栓形成模型均于模型制备后进行光镜病理检查。结果:(1)冠状动脉血栓形成实验:时效关系研究中,大鼠rH预处理的三个不同时间组(造模前10min、30min和60miniv rH 0.5mg/kg)心肌缺血面积评分、伊文思蓝含量及ECG J点和T波抬高变化等指标表明,iv 0.5mg/kg rH后随时间推移,作用逐渐减弱,所测试时间组中,以药后10min rH的抗冠状动脉血栓作用最强,作用维持约1小时;量效关系研究中,大鼠不同剂量组(iv 1.0、0.5、0.25和0.125mg/kg)于造模前10min给药,通过心肌伊文思蓝含量测定表明,其心肌缺血抑制百分率分别为80.84%、65.15%、40.77%和21.20%,计算得50%抑制剂量(ID50)为 0.332mg/kg,模型组和上述给药组心肌缺血范围评分分别为39、12、16、24、<WP=5>和28,ECG J点平均抬高分别为0.31、0.15、0.16、0.20和0.26mv,T波平均抬高分别为0.22、0.08、0.15、0.17和0.15mv,SOD活性依次为30.46、54.64、46.23、44.41和41.75 Nu/mg prot,MDA含量分别为2.31、1.63、1.74、1.79、和1.89 nmol/mg prot。心室经病理切片及光镜检查可见模型组血管内血栓形成,心肌缺血性损伤及变性坏死等,而给药组上述病理改变则随剂量变化发生不同程度减弱或消失。(2)大脑中动脉血栓形成实验:大鼠不同剂量组(1.0、0.5、0.25 mg/kg)于造模前10min给药,脑梗塞面积测定表明,其脑梗塞抑制百分率分别为79.24%、61.82%和46.29%,其50%抑制剂量(ID50)为0.297mg/kg,模型组和上述剂量组行为学改变评分分别为6.5、1.8、3.0和5.5,病理切片和光镜检查可见给药组血栓形成和脑组织缺血性损伤或坏死较模型组有不同程度减轻。以上两项实验中,均以肝素作为阳性对照药进行实验,并且冠状动脉血栓形成实验中还以Refludan作为强度对比药,结果显示受试国产rH与Refludan的药理作用强度相同(p>0.05)。结论:受试国产rH具有明显的抗冠状动脉血栓形成和抗大脑中动脉血栓形成作用,且呈时间和剂量依赖性。持续时间较短(1h),有效剂量范围为0.125-1.0mg/kg,高剂量(1.0mg/kg)时两项实验中抑制百分率均在80%左右,其50%抑制剂量ID50分别为0.336mg/kg和0.297mg/kg,在抗冠状动脉血栓形成实验中其作用强度与已被欧共体批准上市的权威重组水蛭素产品Refludan相同。