【摘 要】
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脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)是一种表达于不同亚细胞间的蛋白酶,在不同的生理功能中发挥着重要作用。APE1的异常表达和亚细胞功能障碍与多种肿瘤疾病的发生有关,所以APE1可作为一种肿瘤标志物诊断癌症,因此开发快速、灵敏的APE1检测方法变得尤为重要。本论文利用精氨酸与双链DNA(ds DNA)修饰的聚酰胺-酰负载苝酰亚胺衍生物四氯苝酐染料(TA),构建了一种快速、灵敏检测APE1的纳米荧光
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脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)是一种表达于不同亚细胞间的蛋白酶,在不同的生理功能中发挥着重要作用。APE1的异常表达和亚细胞功能障碍与多种肿瘤疾病的发生有关,所以APE1可作为一种肿瘤标志物诊断癌症,因此开发快速、灵敏的APE1检测方法变得尤为重要。本论文利用精氨酸与双链DNA(ds DNA)修饰的聚酰胺-酰负载苝酰亚胺衍生物四氯苝酐染料(TA),构建了一种快速、灵敏检测APE1的纳米荧光探针(TA@PR-ds DNA),并将其应用于体外检测。具体的研究内容和结果如下:1、水溶性TA纳米荧光染料的制备。为了提高检测速度,首先将精氨酸(R)修饰至聚酰胺-胺(PAMAM)表面(PR),得到精氨酸修饰的聚酰胺-胺(PR)。通过调整精氨酸和PAMAM的摩尔比,得到三种不同接枝率的PR聚合物,分别为13%(PR13)、33%(PR33)、68%(PR68),选用这三种聚合物分别包裹TA染料,通过优化PR与TA的浓度,得到粒径约为74 nm的TA@PR13,68 nm的TA@PR33,98 nm的TA@PR68,且粒子的稳定性良好。通过PR包裹TA改善了染料间π-π堆积作用,提高了其在水相中的分散性和荧光强度,同时三种纳米荧光染料具有良好的光稳定性,且荧光发射波长在600 nm左右,能够避免细胞内自发荧光等背景信号的干扰。2、TA@PR的特异性ds DNA修饰。在细胞水平,TA@PR68具有良好的生物相容性和较快的细胞摄取速度,能够实现APE1的快速检测,所以选用TA@PR68进行带有AP位点和淬灭基团BHQ2的ds DNA修饰得到TA@PR-ds DNA。调整TA@PR和ds DNA浓度,优化制备的TA@PR-ds DNA粒径约为122 nm,单分散性良好,表面电位约为7.23 m V。3、APE1的体外检测。TA@PR-ds DNA具有高的灵敏度,APE1检测范围1.2-25 U m L-1,检测限为1.1 U m L-1。综上所述,我们构建了一种快速、特异性检测APE1的纳米荧光探针,具有良好的生物相容性和快速的细胞摄取能力。它能够实现多种癌细胞APE1的快速、灵敏地检测,为肿瘤的初期诊断开辟了新的思路和途径。
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