目的：　　克里米亚-刚果出血热（Crimea Congo hemorrhagic fever, CCHF）是一种由克里米亚-刚果出血热病毒(Crimea Congo hemorrhagic fever virus, CCHFV）引起的烈性传染病，致死率可达40％。CCHF是一种蜱媒自然疫源性人畜共患病毒传染病。CCHF是对人类危害最严重的疾病之一，对人的健康和社会安全有很大的威胁。到目前为止，CCHF还没有针对性的治疗药物和安全有效的疫苗。因此本研究目的是建立一种快速、准确、敏感的CCHFV的检测方法，制备该方法的假病毒阳性对照。这将对疾病的早发现、早诊断、早治疗，降低疾病爆发的风险、降低病死率非常重要。　　方法：　　根据Genbank中公布的CCHFV保守性强的S片段，设计引物和探针。通过优化反应体系和反应程序，建立了CCHFV的一步法荧光定量RT-PCR检测方法。提取CCHFV毒株RNA验证该方法的灵敏度、重复性。对登革病毒核酸、基孔肯雅热病毒核酸、黄热病毒核酸、汉坦病毒核酸、乙型脑炎病毒核酸、流感病毒核酸（H1N1和H3N2）进行扩增反应检测方法特异性。合成CCHFV目的基因质粒DNA、构建plv-CCHF重组慢病毒载体。对阳性对照假病毒颗粒进行包装，共转染293T细胞。48小时后收集上清，用实时荧光RT-PCR方法检测假病毒包装情况。将构建的假病毒加入核酸保护剂制备CCHFV阳性对照质控品并进行稳定性试验。应用该方法检测白云机场出入境的100例发热患者血清。　　结果：　　CCHFV的一步法荧光定量RT-PCR方法的灵敏度为7.26×102 copies/μl。方法特异性强，登革病毒核酸、基孔肯雅病毒核酸、黄热病毒核酸、汉坦病毒核酸、乙型脑炎病毒核酸、流感病毒核酸（H1N1和 H3N2）均无特异性扩增曲线。方法的重复性好，7.26×109copies/μl、7.26×107copies/μl CCHFV RNA模板重复测定五次无显著差异。制备了可对CCHFV实时荧光RT-PCR全程监测实验有效性的假病毒阳性对照。质控品在常温放置一个月CT值无明显变化。应用该方法对100份白云机场出入境发热患者血清检测，均未检出CCHFV。　　结论：　　建立的CCHFV实时荧光RT-PCR法，具有特异、灵敏、重复性好、快速诊断的特性。制备的假病毒阳性对照质控品安全、稳定。该方法及阳性对照质控品适用于CCHFV的实验室快速检测。