论文部分内容阅读
目的观察参附注射液对脓毒症模型大鼠干预后,通过检测干预组、模型组、假手术组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸和肠粘膜上皮细胞紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-1、Claudin-3及其mRNA,以及肠黏膜上皮细胞超微结构的变化,探讨参附注射液对脓毒症模型大鼠肠粘膜上皮细胞紧密连接的作用,为临床保护重度脓毒症时的肠粘膜机械屏障提供实验依据。方法将40只SD大鼠以随机数字表法分别入选假手术组(Sham)、脓毒症模型组(CLP)、低浓度用药组(LSF)、中浓度用药组(MSF)、高浓度用药组(HSF)各8只。Sham组大鼠打开腹腔后予缝合,其余组大鼠采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型,Sham组和CLP组分别以生理盐水20ml/kg腹腔注射,其余三组分别以参附注射液5ml/Kg、10ml/kg(均以生理盐水稀释至20ml/kg)、20ml/kg腹腔注射。24h后取血清及回肠组织,分别检测血清TNF-α、DAO、D-乳酸和肠粘膜上皮细胞紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-1、Claudin-3 及其 mRNA、超微结构。结果1.Sham组和CLP组大鼠血清TNF-α、DAO、D-乳酸分别为(46.23±7.76)pg/ml 和(124.40±8.87)pg/ml、(583.42±41.68)U/L 和(1956.34±51.76)U/L、(1.46±0.08)mmol/1 和(3.44±0.14)mmol/1,两组比较均P<0.05;LSF 组、MSF 组、HSF 组血清TNF-α 分别为(105.60±2.44)pg/ml、(90.21±5.57)pg/ml 和(61.50±7.14)pg/ml,血清 DAO 分别为(1795.79±58.93)U/L、(1171.88±49.11)U/L 和(915.01±82.45)U/L,D-乳酸分别为(2.83±0.06)mmol/l、(2.48 ± 0.09)mmol/1 和(2.45±0.69)mmol/1,与CLP 比较均P<0.05。2.Sham组和CLP组肠粘膜上皮细胞紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-l、Claudin-3 表达量分别为 32.91±2.55 和 6.77±1.22、38.93±3.58 和 8.30±2.39、34.73±1.69 和 11.41±1.20、26.65±1.91 和 8.04±1.36,而 LSF、MSF、HSF组的 Occludin 分别为 8.04±1.36、18.35±1.56 和 24.29±9.42,ZO-1 分别为 15.45±2.21、23.22±1.74、29.14±2.49,Claudin-1 分别为 16.06± 1.36、20.22±1.13 和 27.04±1.16,Claudin-3 分别为 13.12± 1.37、18.51±0.89 和 22.57±1.03,与 CLP 组比较均P<0.05。3.Sham组的回肠黏膜上皮微绒毛排列整齐,上皮细胞紧密连接连续,各细胞器完整;CLP组回肠黏膜微绒毛破坏明显,绒毛顶端上皮下毛细血管充血及脱落,中央乳糜管扩张,细胞间紧密连接不连续,间隙增宽,微绒毛变细变短,部分断裂,线粒体严重肿胀,各细胞器受损严重,不见溶酶体。LSF组、MSF组和HSF组回肠黏膜损伤Chiu’s评分与CLP组比较均显著降低(均P<0.05),回肠上皮细胞微绒毛排列基本规则,紧密连接连续,尤其HSF组细胞间紧密连接清晰可见。结论以5、10、20ml/kg腹腔注射参附液后可明显改善脓毒症时发生异常改变的血清TNF-α、DAO、D-乳酸和回肠粘膜上皮细胞紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-1、Claudin-3的表达,以及回肠粘膜上皮细胞紧密连接结构,且这些作用的强度与参附注射液的剂量成正比。