三种对映—贝壳杉烷型二萜化合物对拟南芥幼苗根系生长及根中生长素极性运输的影响的初步研究

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香茶菜属植物为唇形科多年生草本、灌木或亚灌木,全世界共有150多种,广泛分布于热带及亚热带地区。对映–贝壳杉烷型二萜是该属植物的主要次生代谢产物,在其嫩枝叶中含量丰富,目前已从该属植物中分离得到400余种对映–贝壳杉烷型二萜化合物。该属植物在长期进化过程中形成含量如此丰富且种类繁多的次生代谢产物极可能对物种自身的生存及其生态环境的调节作用有着特殊的意义。本研究选择了三种对映-贝壳杉烷型二萜化合物Leukamenin E、Rabdosin B和Epinodosin,以拟南芥幼苗为受试对象,采用主根和侧根的测定、DR5::uidA标记系的GUS组织染色、根尖淀粉粒观察、植物生长素添加及生长素运输阻断等方法研究了这三种化合物对拟南芥幼苗根系生长的调节作用,并探讨了Leukamenin E和Rabdosin B对主根生长及侧根发育的影响与根部生长素水平变化的相关性。最后通过qRT-PCR方法检测了Leukamenin E对生长素极性运输输出载体PIN家族基因的表达的影响。本研究取得如下主要结果:(1)10μM内Leukamenin E对拟南芥幼苗主根没有影响,20-80μM范围内Leukamenin E显著地抑制主根长并具有浓度依赖性;10μM Leukamenin E显著地提高侧根长度和侧根原基总数,20μM显著地提高侧根原基总数;80μMLeukamenin E极显著地抑制侧根长度及侧根原基总数;所有受试范围5-80μMLeukamenin E均极显著地促进侧根原基密度。DR5::uidA标记系的GUS染色结果显示,10μM和20μM Leukamenin E能显著提高拟南芥幼苗主根根尖生长素响应基因的表达;40μM和80μM处理组无显著性影响。(2)20μM Rabdosin B显著地促进主根长,80-120μM Rabdosin B显著地抑制其主根长;40-120μM Rabdosin B显著地促进侧根长度、侧根原基总数以及侧根原基密度。DR5::uidA标记系的GUS染色结果显示,40-120μM Rabdosin B能显著提高拟南芥幼苗主根根尖生长素响应基因的表达;5-20μM处理组无显著性影响。(3)40-120μM Epinodosin虽然显著地抑制主根长,但却能显著地促进侧根长度以及侧根原基密度;80-120μM Epinodosin显著地抑制侧根原基总数。DR5::uidA标记系的GUS染色结果显示,80μM和100μM Epinodosin能显著提高拟南芥幼苗主根根尖生长素响应基因的表达;5-40μM和120μM处理组无显著性影响。(4)生长素极性运输抑制剂NPA联合Leukamenin E和Rabdosin B处理拟南芥幼苗的实验表明,10μM Leukamenin E和80μM Rabdosin B均对NPA引起侧根长度减小没有逆转恢复作用,但对NPA引起侧根原基数减少有显著性恢复作用。进一步的DR5::uidA标记系的GUS染色结果显示,10μMLeukamenin E和80μMRabdosin B能恢复由NPA引起的根尖部生长素分布的减少,以及减弱由NPA引起的叶部生长素分布的积累增多,缓解NPA对生长素极性运输的抑制效应。(5)80μM Leukamenin E以及120μM Rabdosin B和120μM Epinodosin能够抑制根尖柱细胞中造粉体合成,影响了拟南芥根的向地性。(6)Leukamenin E对拟南芥根中生长素输出载体基因PIN1、PIN2、PIN3、PIN4和PIN7的表达具有及显著的抑制作用。(7)这3种化合物对拟南芥幼苗生长素极性运输的影响与生长素极性运输抑制剂NPA相比,其作用机制完全不同。前者通过抑制生长素输出载体基因表达使生长素积累在根尖部,对叶部生长素分布无影响,而NPA使生长素积累在叶部,对根部生长素分布无影响。综上,3种对映-贝壳杉烷型二萜化合物Leukamenin E、Rabdosin B和Epinodosin在一定浓度范围内显著影响拟南芥根中生长素的极性运输,通过显著地抑制拟南芥根中生长素输出载体基因PIN1、PIN2、PIN3、PIN4和PIN7的表达,导致根部生长素大量积累,从而引起对拟南芥主根长度的抑制效应及对侧根发育促进作用。
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