【摘 要】
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L-氨基酸氧化酶(LAAO;EC 1.4.3.2)通常为二聚体黄素蛋白酶,能立体特异性氧化L-氨基酸脱氨,生成对应的α-酮酸、氨和H2O2。不同来源的LAAO具有多种不同的生物学功能,包括抗菌、
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L-氨基酸氧化酶(LAAO;EC 1.4.3.2)通常为二聚体黄素蛋白酶,能立体特异性氧化L-氨基酸脱氨,生成对应的α-酮酸、氨和H2O2。不同来源的LAAO具有多种不同的生物学功能,包括抗菌、抗艾滋病病毒、抗肿瘤、诱导细胞凋亡等,而这些生物学功能大多数是由于其产物H2O2作用的结果。课题组前期从海洋生境中分离到一株黄色产LAAO的Pseudoalteromonas sp.B3,并在其培养平板上获得一株红色自发突变株R3。相对于菌株B3,菌株R3具有更强的产LAAO能力。本课题期望通过分析菌株B3和R3对氧胁迫适应能力的不一样,来揭示它们产LAAO能力的差异。通过外加H2O2来人为制造氧胁迫环境,探究了氧胁迫对菌株B3和R3生长代谢的影响。研究发现,H2O2胁迫对菌株B3和R3的生理生化特性如基因组DNA、脂质及菌体的群体形态均有影响,相对而言,H2O2对菌株B3的损伤更明显,这可能与菌株B3清除H2O2的能力更弱有关。利用实时定量PCR技术,对胞内ROS清除体系应激响应氧胁迫的作用进行研究,发现H2O2会激活菌株B3和R3胞内ROS清除系统,它们的脱毒相关基因rpoS、ahp和cat转录水平均被显著上调。此外,高低浓度H2O2的胁迫下,相比较于菌株B3,菌株R3胞内脱毒相关基因rpoS、ahp和cat上调水平均更高,表明菌株R3对氧胁迫应激的响应更灵敏,这可能赋予了菌株R3更强的ROS清除能力。通过分析菌株B3和R3产LAAO能力的差异与它们氧适应能力不同的相关性,发现菌株B3和R3胞内氧胁迫解除能力上的差异是LAAO差异化表达的一个重要原因。本论文揭示了菌株B3和R3产LAAO能力差异的机理,为LAAO的转录表达及调控提供一定的理论线索,同时,为LAAO的生物合成及体外异源高效表达具有重要的理论指导意义。
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