论文部分内容阅读
卵巢癌在女性常见的恶性肿瘤中排名第七位,占女性新发肿瘤病例的3.6%是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一。尽管早期积极接受肿瘤细胞减灭术的基础上施以紫杉醇与铂类药物为主的联合化疗,约70%的上皮性卵巢癌患者仍遭受肿瘤复发的困扰,已成为严重威胁女性生命的最大疾患。因此,研究卵巢癌的病因,探讨卵巢癌的进展,为卵巢癌的早期诊断及治疗提供理论依据是卵巢癌研究的热点问题。 Forkhead转录因子家族成员通过转录调节、信号转导等途径,参与包括细胞代谢、分化及凋亡等多个生物学过程,家族成员的基因突变可引起胚胎发育畸形,与癌症发生、发展密切相关。FOXC1基因位于人染色体6p25基因编码区。存在于人类的多种组织及器官中。FOXC1可能是一个重要的肿瘤标志物,对于肿瘤的诊断及治疗都具有重要意义。因此,探讨FOXC1基因表达调控的机制,为阐明FOXC1基因与卵巢癌发生、发展的关系提供了理论基础。 目的:本实验通过RT-PCR和Western-blot研究FOXC1在卵巢上皮癌及正常卵巢组织中的表达,采用甲基化特异性PCR方法检测不同组织中FOXC1基因启动子区甲基化状态,探讨FOXC1基因表达与启动子甲基化及卵巢癌的关系。为卵巢癌的早期诊断及靶向治疗提供新的思路。评价FOXC1在卵巢癌早期诊断和治疗中应用的可行性。 材料与方法: 研究对象:收取2014年1月至2015年3月至郑州大学第三附属医院妇产科及郑州大学第一附属医院妇产科的新鲜手术标本共51例。其中30例上皮性卵巢癌、21例正常卵巢组织。正常卵巢组织取材于因子宫肌瘤及子宫腺肌瘤行附件切除术的病例。 方法: 1.运用实时荧光定量PCR(PR-PCR)法对以上51例组织中的FOXC1 mRNA的表达进行检测。 2.运用蛋白印记(Western-Blot)对以上51例组织中的FOXC1蛋白水平进行检测。 3.运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP-PCR)法对以上51例组织中的FOXC1启动子区域甲基化水平进行检测。 统计学处理:计量数据以均数±标准差(?X±S)表示,采用SPSS17.0统计软件进行统计分析,两组数据间的差异采用t检验和fisher’s精确概率检验,以α=0.05为检验水准。 结果: 1.上皮性卵巢癌组织和正常卵巢组织中均存在 FOXC1 mRNA的表达,2组 FOXC1 mRNA表达的相对含量上皮性卵巢癌为0.33±0.10,正常卵巢组织为1.19±0.17,两组间差异有统计学意义。卵巢癌组 FOXC1mRNA的表达与临床分期、组织分化程度无关,与有无淋巴结转移间相关。 2.上皮性卵巢癌组织和正常卵巢组织中均存在 FOXC1蛋白的表达,2组FOXC1蛋白的相对含量上皮性卵巢癌为0.21±0.08,正常卵巢组织为0.41±0.11。卵巢癌组 FOXC1蛋白的表达与临床分期、组织分化程度及有无淋巴结转移均不相关。 3.所有正常卵巢组织中发现2例 FOXC1基因启动子区域甲基化;上皮性卵巢癌中 FOXC1基因启动子甲基化16例,甲基化率53.3%。卵巢癌中启动子甲基化阳性FOXC1 mRNA表达量为0.28±0.10,甲基化阴性为0.40±0.05,两者比较差异有统计学意义。上皮性卵巢癌患者中,启动子甲基化与与临床分期、组织分化程度无关,与有无淋巴结转移间相关。 结论: 1.上皮性卵巢癌及正常卵巢组织中均存在FOXC1的表达,且上皮性卵巢癌组织中存在FOXC1的表达抑制。 2.上皮性卵巢癌中FOXC1启动子区域较正常卵巢组织甲基化频率增高。 3.FOXC1启动子甲基化水平在卵巢癌淋巴结转移阳性的患者中显著高于淋巴结转移阴性的患者。