目的:《中国药典》2015年版仅通过测定夏佛塔苷的含量对广金钱草进行质量评价,为了建立更全面、准确的质量评价方法,本研究对广金钱草水提物和其总黄酮在药效方面进行比较研究,并结合入血成分分析以探索其药效物质基础寻找合理合适评价广金钱草质量的药效成分。方法:1.广金钱草水提物及其总黄酮对抑制肾草酸钙结石的药效学比较为明确广金钱草总黄酮为其药效部位,本研究通过灌胃15%乙二醇水溶液建立SD雄性大鼠肾草酸钙结石模型,分别给予广金钱草水提物、总黄酮药物治疗,测定各组大鼠血清与尿液生化指标并制作肾脏病理切片观察其病理状况,比较药材水提物与其总黄酮部位的药效异同。2.UPLC-Q-TOF-MS法分析广金钱草水提物的入血成分大鼠灌胃广金钱草水提物后,采用UPLC-Q-TOF-MS法对含药血清、空白血清、混合对照品溶液及广金钱草供试药液进行对比分析。根据色谱峰保留时间及质谱碎裂规律,结合文献和对照品的相关信息,以确定入血成分。3.“一测多评”法测定不同采收时期广金钱草中5种黄酮类成分选择主要入血成分作为定量指标,采用HPLC法,以夏佛塔苷为内参物,建立其他4种成分(维采宁-2、异荭草苷、异夏佛塔苷、异牡荆苷)与夏佛塔苷的相对校正因子(RCF),并考察其耐用性。通过考察“一测多评”法的计算值与外标法实测值的相似度,以验证“一测多评”法的可行性和方法适用性。4.基于UPLC-Q-TOF-MS的广金钱草水提物干预大鼠肾草酸钙结石的血清代谢组学研究。采用UPLC-Q-TOF-MS方法对空白组、模型组和广金钱草水提物给药组大鼠血清样本进行分析,利用Makeview2.1进行PCA分析,并采用SIMCA 14.1进行PLS-DA多元统计分析,结合T检验筛选出差异的代谢物。将发现的差异代谢物,用MetaboAnalyst 3.0进行通路分析,进一步结合HDMB、KEEG等数据库解析差异代谢物的生物学意义。成果:1.广金钱草水提物、广金钱草总黄酮均能降低肾草酸钙结石大鼠血清肌酐、尿素氮、血Ca2+、血Mg2+水平,改善肾结石大鼠肾功能;HE病理切片结果表明,与空白组比较,模型组大鼠肾小管管腔可见明显黄色肾草酸钙结石晶体,发生明显病变,而给予广金钱草水提物、广金钱草总黄酮均能不同程度抑制大鼠肾草酸钙结石,保护大鼠肾脏。2.本研究对大鼠口服广金钱草水提物浸膏的含药血清进行分析,准确指认了 9个入血原型成分,包括8个黄酮类成分(维采宁-2、异夏佛塔苷,夏佛塔苷、夏佛塔苷同分异构体Ⅰ、夏佛塔苷同分异构体Ⅱ、异牡荆苷、芹菜素、染料木素)和1个酚酸类成分(阿魏酸)。3.成功建立同时测定广金钱草5种黄酮类活性成分的“一测多评”法。方法的线性范围、精密度、准确度、加样回收率均符合方法学的要求。所建立的一测多评方法计算的结果与外标法测定结果没有显著差异,相似度均大于0.9998,该方法准确、可行。4.广金钱草对肾草酸钙模型大鼠的治疗作用与逆转乙二醇导致的代谢紊乱有关,主要与逆转苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成和代谢;缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的合成和代谢;泛酸和辅酶A合成;甜菜碱代谢以及尿苷代谢紊乱有关。结论:广金钱草总黄酮部位是其抗肾草酸钙结石的重要药效部位;入血成分分析准确指认了8个入血原型黄酮类成分,1个原型酚酸类成分;以其中5个主要黄酮类活性成分为指标的“一测多评”法可作为质量评价模式用于广金钱草的质量评价,广金钱草叶子中的黄酮类成分和叶-茎干重比在不同采收时期的动态变化是导致不同采收时期广金钱草药材质量不一的主要因素,广金钱草的最佳采收时期应该选择在花期;代谢组学技术可以运用于广金钱草的药理作用研究,连续给药广金钱草水提物21天可以改善肾草酸钙结石大鼠的机体代谢紊乱,从而发挥药效。