金花茶叶多酚类化合物分析研究

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目的:以金花茶叶为研究对象,快速鉴定金花茶叶提取液中化学成分。选定指标性成分,建立金花茶叶的HPLC指纹图谱及含量测定方法,为更加有效控制金花茶药材的质量提供评价依据。方法:采用UPLC-QTOF-MS技术,根据分子离子峰确定可能的分子量、成分结构特点与保留时间,结合文献数据及对照品比对,对色谱峰进行初步归属。采用HPLC法结合相似度评价、聚类分析及主成分分析技术建立金花茶叶中多酚类成分的指纹图谱。根据液质联用技术鉴定结果,选订指标成分。应用单因素试验结合响应面分析法,对指标成分提取工艺进行预测分析和工艺验证,在单因素试验的基础上选取因素不同水平,根据星点试验设计原理,采用三因素五水平的响应面分析法确定最佳提取工艺。根据一测多评法原理,采用斜率校正及多点校正法建立金花茶叶中指标成分之间的相对校正因子,同时采用保留时间差和相对保留值2种方法定位色谱峰,采用外标法与一测多评法进行比较,确定只用1个对照品测定金花茶叶中3个指标成分的含量。结果:通过UPLC-QTOF-MS分析,结合文献数据及对照品比对,鉴定出其中5个多酚类成分,分别为3’-甲基-鞣花酸-4’-葡萄糖苷(3’-methy-4’-glucoside-ellagic acid)、鞣花酸(Ellagic acid)、3,4-O,O-次甲基-鞣花酸-4’-葡萄糖苷(Okicamellia)、3’-甲基鞣花酸(3’-methy ellagic acid)、3,4-O,O次甲基-鞣花酸(3,4-O,O-methylidyne-ellagic acid)。对10批金花茶叶多酚类成分指纹图谱的测定与分析,共标定共有峰10个,和UPLC-QTOF-MS结果结合,鉴定出其中5个共有峰。10批金花茶叶相似度均>0.90,并通过聚类分析及主成分分析,将10批样品分为4类。通过响应面分析法,以鞣花酸、Okicamellia、3,4-O,O-次甲基-鞣花酸的含量及三者总含量为指标,确定金花茶叶多酚类化合物最佳提取工艺为超声提取法,提取溶剂为50%丙酮-1mol·L-1盐酸(1:1)溶液,溶剂用量为11mL,超声时间为90min,超声提取两次。通过比较,斜率法与多点法之间无显著性差异,各成分相对校正因子重现性良好;保留时间法相比相对保留值更适合于色谱峰的定位。鞣花酸、okicamelliaside和3,4-O,O-次甲基-鞣花酸按一测多评法与外标法结果无显著性差异。结论:从金花茶粗提取液中快速鉴定了5个多酚类化合物。与LC-MC技术结合,进行了指纹图谱研究。通过响应面分析法优选提取工艺,同时结合一测多评法对金花茶叶进行多成分含量测定,方法简便快捷,结果准确可靠,为金花茶药材质量标准的提高和全面控制提供了参考和技术支持。
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