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干扰素β（IFNβ）具有抗病毒、抗肿瘤、抗增殖和免疫调节作用。临床上主要用于乙型肝炎、丙型肝炎、多发性硬化症以及多种肿瘤的治疗。但是体内半衰期较短限制其应用，所以有必要开发IFN β长效蛋白药物。因此，本实验室构建了人血清白蛋白与β干扰素融合蛋白（rhHSA-IFNβ）并建立了发酵纯化工艺。为满足临床前药物的评价要求，需要进行目的蛋白的质量鉴定。本研究采用毕赤酵母工程菌株于30L发酵罐中试制备rHSA-IFNβ融合蛋白。发酵液经超滤浓缩再蓝色葡聚糖凝胶层析、G25凝胶过滤层析和SP阳离子交换层析分离纯化。高效液相法(HPLC)测定产品纯度达到95%以上，满足临床纯度要求。蛋白的回收率达到29%。目前尚无rHSA-IFNβ融合蛋白的质量标准，本研究参照《中国药典》第三部(2010版)注射用重组人干扰素α2b(酵母)原液检定要求对三批中试生产原液进行质量检测。MALDI-TOF/TOF质谱法测定融合蛋白的相对分子质量分别为89070、88669、88836，用糖苷酶F切掉糖链后SDS-PAGE条带偏低，证明融合蛋白存在糖基化修饰；等电聚焦电泳法测定其等电点为6.34；采用Edman降解法测定其N-末端氨基酸序列为：NH2-D-A-H-K-S，与HSA N端理论序列相同。Western blotting结果显示该融合蛋白兼具人β干扰素和人白蛋白的双重抗原性；以胰蛋白酶裂解-反相高效液相色谱法对融合蛋白样品肽图分析，胰蛋白酶消化后，rHSA-IFNβ被裂解成4肽段，反复试验三次结果相同，表明该方法适合对rHSA-IFNβ肽图分析，说明产品的质量稳定性；融合蛋白经紫外光谱分析，最大吸收波长为278nm，与理论相符。鲎试剂凝胶限度试验检测每毫克融合蛋白的细菌内毒素含量小于10EU；宿主菌蛋白残留量采用酶联免疫法检测，结果显示毕赤酵母蛋白残留量占融合蛋白的比例小于0.05%；荧光染色法测定每毫克融合蛋白的外源性DNA残留量均小于10ng/mL，达到治疗性生物制品原料药标准。参照2010版中国药典关于IFNα2b活性检测方法和美国药典关于IFN β活性检测方法，测得三批rHSA-IFNβ融合蛋白的生物学活性为1.9×106IU/mg、1.5×106IU/mg、1.1×106IU/mg。