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目的:从蛇毒中分离纯化半胱氨酸蛋白酶抑制剂,并探讨其抗肿瘤细胞体外侵袭的能力。 方法:研究蛇毒粗毒对半胱氨酸蛋白酶的抑制特性;并运用亲和层析、离子交换、以及凝胶过滤等方法,从湖南产的中华眼镜蛇毒中分离纯化半胱氨酸蛋白酶抑制剂的单一组分;通过毛细管电泳方法鉴定纯化产物的纯度;通过质谱分析、酶抑制动力学等方法鉴定理化性质;并运用体外重组基底膜实验分析酶抑制剂对B16黑色素瘤细胞侵袭能力的影响。 结果:经分子筛层析法分离,发现中华眼镜蛇毒中含有两种半胱氨酸蛋白酶抑制剂,其中的一种已被通过亲和层析和离子交换层析方法纯化出来,并确定其分子量小于1000Dalton,该分子量酶抑制剂在蛇毒中尚未见报道。经酶抑制动力学分析,这种小分子量酶抑制剂具有对木瓜蛋白酶(papain)和组织蛋白酶B(cathepsinB)强烈的竞争抑制作用。通过体外重组基底膜实验中发现,这种酶抑制剂具有抑制B-16黑色素瘤细胞侵袭能力。 结论:本研究从蛇毒中提纯并鉴定了一种新的小分子量的、具有抑制肿瘤细胞侵袭能力的半胱氨酸蛋白酶抑制剂。