【摘 要】
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黑水虻作为一种资源昆虫,近年来在餐厨垃圾、畜禽粪便、农业有机固废资源化利用等方面得到了越来越广泛的应用。黑水虻幼虫肠道微生物非常丰富,但具有生防功能的微生物报道则较少。从黑水虻肠道中分离具有生防功能的微生物,具有通过黑水虻作为生物反应器发酵生产生防菌肥的潜能。本文通过以豆渣、猪粪、淤泥、鸡粪四种饲料喂养的黑水虻幼虫肠道中分离纯化具有抑菌活性的功能微生物。菌株Y4-39是从淤泥喂养的幼虫肠道中筛选得
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黑水虻作为一种资源昆虫,近年来在餐厨垃圾、畜禽粪便、农业有机固废资源化利用等方面得到了越来越广泛的应用。黑水虻幼虫肠道微生物非常丰富,但具有生防功能的微生物报道则较少。从黑水虻肠道中分离具有生防功能的微生物,具有通过黑水虻作为生物反应器发酵生产生防菌肥的潜能。本文通过以豆渣、猪粪、淤泥、鸡粪四种饲料喂养的黑水虻幼虫肠道中分离纯化具有抑菌活性的功能微生物。菌株Y4-39是从淤泥喂养的幼虫肠道中筛选得到的,能显著抑制辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）和辣椒白绢病菌（Sclerotium rolfsii Sacc.）菌丝生长。经形态学及16S r DNA序列鉴定,Y4-39为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。分别以辣椒疫霉菌和辣椒白绢病菌的抑菌活性为筛选指标,对Y4-39的培养基配方和发酵条件进行了系统优化,对抑制辣椒疫霉菌的Y4-39的最适培养基配比为可溶性淀粉8.0 g·L-1、酵母粉7.0 g·L-1、胰蛋白胨4.0 g·L-1、Mg SO47.0 g·L-1;对抑制辣椒白绢病菌的Y4-39的最适培养基配比为可溶性淀粉6.0 g·L-1、酵母粉6.0 g·L-1、胰蛋白胨4.0g·L-1、Na Cl 8.0 g·L-1,最适发酵条件均为温度30℃,初始p H为7.0,接种量0.7%,转速180 r·min-1。对辣椒疫霉菌、辣椒白绢病菌的抑制率分别为68%和62%。Y4-39抑制这两种病原菌的最适培养基不同,意味着对辣椒疫霉菌、辣椒白绢病菌抗菌物质成分可能不一样。发酵液抑菌物质对酸性条件（p H3～6）和紫外光敏感。全基因组学测序发现Y4-39基因组只含有1个环状的染色体,不含质粒,染色体基因组长度为3,891,759 bp,编码3,713个蛋白基因,含有9个完整的r RNA基因簇,从其基因组中鉴定出了12个候选次生代谢产物合成基因簇,8个产物已知,分别为表面活性素（surfactin）、大环内酰亚胺H（macrolactin H）、bacillaene,芬枯草菌素（fengycin）,地非西丁（difficidin）,杆菌素（bacillibactin）和杆菌溶素（bacilysin）。对已公布全基因组序列的295个Bacillus velezensis菌株进行了比较基因组学分析,结果显示,Bacillus velezensis可分为两个Group,Y4-39位于Group I,根际促生菌FZB42位于Group II,Y4-39与分别来自大豆发酵制品豆酱发酵菌Bacillus velezensis SCDB 291和Bacillus velezensis SCGB1最为相似,平均核苷酸一致性（ANI）分别为99.65%和99.63%。经RT-PCR检测发酵不同时期各基因簇关键基因的表达量,如羊毛硫肽、芬枯草菌素、地非西丁、萜类物质等合成基因簇基因表达较高,初步表明其能产生多种具有抑菌活性物质。
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