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何首乌为蓼科植物何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)的干燥块根。在临床上何首乌不仅常被用作滋补类的中药,而且还可作为食疗保健品。二苯乙烯苷是何首乌的主要药效成分,但其对酪氨酸酶活性的影响说法不一,且二苯乙烯苷对酪氨酸酶活性影响的作用机制尚未明确。我们必须找到一种简单有效的二苯乙烯苷的纯化工艺,并探讨其对酪氨酸酶活性的影响及对酪氨酸酶活性影响的作用机制。研究目的:利用DPPH自由基清除法来检测何首乌经高速逆流色谱分离所得各组分的抗氧化活性,优化何首乌二苯乙烯苷的纯化工艺,探讨何首乌二苯乙烯苷对酪氨酸酶活性的影响及其作用机制。研究方法:1.利用高速逆流色谱法一步分离何首乌粗提液,得到的各组分分别进行DPPH自由基清除实验,比较各组分的抗氧化活性。2.运用高速逆流色谱法建立简单可行的高纯度二苯乙烯苷的纯化工艺。3.利用多巴速率氧化法探讨何首乌二苯乙烯苷对酪氨酸酶活性的影响。4.对二苯乙烯苷与酪氨酸酶的反应进行酶促动力学分析,得到酶促动力学参数,建立林贝氏双倒数图,探讨二苯乙烯苷对酪氨酸酶的作用机制。结果:1.利用高速逆流色谱色谱法分离何首乌粗提液,得到了四种组分,其中3号组分抗DPPH自由基活性最大,经HPLC鉴定其为二苯乙烯苷,且纯度大于95%。2.利用粗提液碱化法和高速逆流色谱法建立了一种简单可行的高纯度二苯乙烯苷纯化工艺,二苯乙烯苷的纯度可达99.15%。3.多巴速率氧化法显示低浓度二苯乙烯苷对酪氨酸酶活性有促进作用(其IC50为0.013mg/ml、0.018mg/ml、0.007mg/ml),而高浓度二苯乙烯苷对酪氨酸酶活性有抑制作用(其IC50为1.177mg/ml、1.046mg/ml、1.203mg/ml)。4.通过二苯乙烯苷与酪氨酸酶的酶促动力学分析,得到了酶促动力学参数,制作了林贝氏双倒数图,分析二苯乙烯苷对酪氨酸酶活性影响的作用机制可能为混合性激活机制。结论:通过DPPH自由基清除实验,得到了二苯乙烯苷是何首乌中抗氧化活性的主要成分的结论;在对何首乌粗提液碱化的前提下,利用高速逆流色谱法找到了一种简单可行的二苯乙烯苷纯化工艺;初步探讨了二苯乙烯苷对酪氨酸酶活性的影响及其对作用机制。