论文部分内容阅读
目的:1、探讨青蒿琥酯拮抗肺癌细胞A549、95D迁移和侵袭的作用。2、探讨Hu R在青蒿琥酯类药物拮抗非小细胞肺癌转移中的潜在机制。方法:1、用不同质量浓度的青蒿琥酯作用于人肺癌A549、95D细胞株0h、24h、48h,凭借CCK-8实验观察对肿瘤细胞增殖影响情况。2、用普通培养液和含有30μg/m L青蒿琥酯的培养液分别处理A549、95D细胞株24h,凭借划痕试验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭的改变情况。3、用梯度质量浓度(0μg/m L、60μg/m L、120μg/m L)的青蒿琥酯作用A549、95D细胞株24h,收集细胞加入凋亡试剂用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。4、以30μg/m L青蒿琥酯作用于肺癌A549、95D细胞株48h后,提取各细胞总RNA,用RT-PCR方法检测A549、95D细胞中Hu R、MMP-9m RNA变化情况。5、以30μg/m L青蒿琥酯作用于A549、95D细胞株48h后,提取各细胞总蛋白并利用BSA试剂盒测定各蛋白浓度,以Western blotting实验检测A549、95D细胞中Hu R、MMP-9蛋白表达变化情况。6、采用SPSS 19.0统计软件对所得数据进行统计学分析。所有计量数据采用(?)±s表示,多组间差异采用单因素方差分析,组内对比采用t检验方法,以P<0.05表示有统计学意义。结果:1、在本研究所涉及的浓度和时间范围内,随着给予青蒿琥酯浓度的增加和作用时间的延长,其对肺癌A549、95D细胞的抑制作用也逐渐增强,并且显示95D细胞对青蒿琥酯的敏感性比A549更高,较低浓度的青蒿琥酯就可以显著抑制95D细胞的增殖(P<0.05)。2、实验结果显示,利用30μg/m L青蒿琥酯作用肺癌A549、95D细胞能够显著抑制两种肿瘤细胞向划痕区域的迁移,并且显著抑制A549、95D细胞的侵袭能力(P<0.05),同时显示青蒿琥酯对95D细胞的作用更为敏感。3、细胞凋亡实验显示,所设青蒿琥酯浓度及作用时间范围,对两组肺癌细胞凋亡影响不明显,无统计学差异(P﹥0.05)。4、利用RT-PCR实验方法检测显示,经青蒿琥酯处理的A549和95D两种细胞中Hu R m RNA于对照组比较差异无统计学意义(P﹥0.05),MMP-9 m RNA含量显著低于对照组(P<0.05)。5、Western blotting实验结果显示,与对照组相比较青蒿琥酯显著降低肺癌细胞A549、95D中Hu R、MMP-9蛋白表达水平(P<0.05)。结论1、本次研究明确了青蒿琥酯能够抑制肺癌A549、95D细胞增殖、迁移、侵袭能力,对两组肿瘤细胞的凋亡影响不明显。其中较低浓度青蒿琥酯(30μg/m L)就可显著抑制两组细胞的迁移和侵袭。提示青蒿琥酯对肺癌细胞A549、95D生物学行为的影响可能是通过不同分子途径完成的。2、本研究结果提示青蒿琥酯对体外培养的人肺癌A549、95D细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为所发挥的作用可能与其影响Hu R、MMP-9有关。