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目的：结直肠癌（CRC）传统的治疗方法主要是手术切除、放射治疗和化学药物治疗，这些方法对早期肿瘤可获得较好疗效，但对晚期肿瘤和术后复发及转移者，常难于获得理想效果。近十年来，肿瘤的基因治疗取得了飞速的发展，自杀基因的治疗是其中比较有临床应用前景的治疗方法之一，在CRC治疗的实验研究中已取得了一定的效果。但基因转染效率的低下及目的基因表达不稳定是阻碍其临床应用的瓶颈。本课题研究的目的：（1）构建含CD基因的真核表达载体pCDA。（2）将放射线与CD基因联合作用于CRC细胞，观察：①5-FC对转染CD基因的CRC细胞的杀伤作用；②放射线对质粒载体转染效率的影响；③放射线联合CD自杀基因对CRC细胞的杀伤作用。为临床治疗CRC和肿瘤的术后复发及转移提供理论依据。 方法：用内切酶将CD片断从逆转录病毒载体pCD2中切下，构建含CD基因的真核表达质粒载体pCDA，pCMX GFP质粒中的GFP基因作报告基因。用内切酶在目的基因下游酶切，形成线性化质粒。在不同剂量放射线作用下，将脂质体包裹超螺旋及线性质粒转染肿瘤细胞；用荧光显微镜观察GFP的转染效率，用克隆形成试验计算CD基因的转染效率。放射线联合5-FC作用转染CD基因的肿瘤细胞，用MTT试验获得细胞的杀伤效率。 结果：1.脂质体包裹的质粒对肿瘤细胞的转染效率为5.4％-6.8％，超螺旋质粒与线性质粒之间无明显差异（P＞0.05）。但肿瘤细胞经放射线作用后，超螺旋质粒的转染效率提高2-4倍，而线性质粒的转染效率可以提高6-10倍，二者有显著差异（P＜0.01）。2.被转染GFP基因的对照组肿瘤细胞经克隆培养后，表达绿色荧光蛋白的时间平均为12天（9-15天），超螺旋质粒组与线性质粒组之间差异不显著。照射组转染超螺旋GFP基因的肿瘤细胞中绿色荧光蛋白存在的时间平均为14天u叫2天人 转染线性GFP基因组为 19天（11－42天）。在放射线作用下，有 0．5％的转染超螺旋GFP基因的细胞及2％的转染线性WP基因细胞可长时间表达绿色荧光蛋白（＞35天）。3．转染空载体组的肿瘤细胞经10tnM 5干C作用24小时后，对肿瘤细胞杀伤效率为 2饰 LDg。剂量的放射线联合空载体作用的肿瘤细胞，肿瘤细胞杀伤效率为90％；转染CD基因组的肿瘤细胞，经5干C作用后，LoVO细胞的杀伤率为12．4％，8348细胞的杀伤率为13．7％；放射线联合CD基因组的肿瘤细胞，随着CD基因转染效率的提高，10mMS干C对剩余肿瘤细胞的杀伤效率明显增强，LOVO细胞的杀伤率为91儿8348细胞的杀伤率为89儿加上放射线的杀伤作用，肿瘤细胞的总体杀伤效率为99％。 结论：山 5干C可以杀死转染 CD基因的肿瘤细胞，CD／5干C系统有旁观者效应。（2）放射线可以增加质粒载体对肿瘤细胞的转染效率，对于线性质粒载体的促转染效率更高。（3）放射线可以延长目的基因的表达时间。（4）放射线联合CD基因可以有效的杀伤CRC细胞，二者在治疗CRC中有协同作用。（5）放射线联合CD基因对CRC细胞杀伤作用的研究为临床治疗中晚期CRC和肿瘤术后复发或转移提供了重要的理论依据。