藏药作为中国传统医药文化宝库不可分割的重要部分之一,有着上千年的历史,临床应用广泛,得到广大患者的认可和信赖。由于历史和地域的原因,对于藏医药的研究相对较为滞后,药效成分研究更是较为罕见。本课题是基于藏医临床应用中时辰给药方式,探索联合给药优于单方给药合理性的物质基础。本课题所研究的三个藏成药经典方为：二十五味珊瑚丸,如意珍宝丸,二十味沉香丸；二十五味珊瑚丸收载于《中国药典》2015版；如意珍宝丸、二十味味沉香,均收在于卫生部药材标准藏药第一册。为更好的控制三个藏成药在体内化学成分的准确性和稳定性,本研究首先对其三个藏成药进行质量控制,在此研究基础上,探究进入血液循环的原型成分和代谢产物,以期进一步阐明该时辰给药的合理性。本实验分为两部分：第一部分为藏药经典方有效指标成分的指认分析和含量测定方法的建立；第二部分为体内移行入血成分的追踪。第一部分藏药经典方有效指标成分的指认分析和含量测定方法的建立1、采用HPLC法建立了三个藏成药中的没食子酸含量测定方法,即色谱柱Global Chromatography C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相：甲醇-0.2%甲酸水(2：98),λ=280nm,结果在0.896-4.48μg范围内线性关系良好；建立了如意珍宝丸、二十味沉香丸中的羟基红花黄色素A的含量测定方法,即色谱柱Global Chromatography C18,流动相：甲醇-乙腈-0.5%磷酸水(29：2：69),λ=403nm,结果在0.1286-0.6432μg范围内线性关系良好；建立了二十五味珊瑚丸中羟基红花黄色素A、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ的含量测定方法,即色谱柱Global Chromatography C18,流动相A-甲醇、B-乙腈、C-0.2%甲酸水,梯度洗脱程序为0-20min,A26%-B2%-72%;20-23min, 26-65%A-B2-0%,23-50min,65%A,35%C,λ=400nm、440nm。2、建立了三个藏成药的特征图谱,方法为：色谱柱Global Chromatography C18 (4.6mm×250mm,5μm),流动相A为乙腈,B为0.2%甲酸水,梯度洗脱程序为0-80min, 2-20%A,80-160min,20-38%A,160-200min,38-68%A,200-220min,68-75%A;DAD检测器扫描范围为190-440nm,实时检测波长为250nnm、400nm,柱温35℃,流速1ml/min。结果三个藏药的10批次样品的相似度平均值均在0.9以上,表明各自样品中其主要化学成分基本类似,且样品质量稳定一致性较好。第二部分 体内移行入血成分的追踪本研究采用血清药物化学的法对三个藏成药经典方进行了方中血浆移行成分的研究,通过直观比较对三个藏成药的体内、外的色谱图进行分析研究,探索追踪入血的成分。结果表明,在二十五味珊瑚丸、如意珍宝丸和二十味沉香丸的色谱图中分别筛选出了12、14、15个血中移行成分。二十五味珊瑚丸成方中12个成分中有8个以原型成分吸收入血,如意珍宝丸有8个以原型成分吸收入血,二十味沉香丸中5个以原型入血的成分。