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甘油单-二酰酯脂肪酶基因的克隆和表达

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【摘要】

：

本研究以卡门柏青霉-PG3为出发菌株,提取其总RNA,应用RT-PCR反应扩增出860bp左右的片段,核苷酸序列分析表明其与甘油单-双酰酯脂肪酶(MDGL)基因(mdlA)一致。将mdlA基因克隆到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导后,重组的脂肪酶在宿主菌中的表达量可达菌体总蛋白量的45.2%。重组蛋白包涵体溶解、复性后用Ni~(2+)组氨酸结合树脂螯合层

【作者】

：

【机构】

：

北京化工大学

【发表日期】

：

2005年01期

【关键词】

：

甘油单-二酰酯脂肪酶克隆表达大肠杆菌毕赤酵母

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本研究以卡门柏青霉-PG3为出发菌株,提取其总RNA,应用RT-PCR反应扩增出860bp左右的片段,核苷酸序列分析表明其与甘油单-双酰酯脂肪酶(MDGL)基因(mdlA)一致。将mdlA基因克隆到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导后,重组的脂肪酶在宿主菌中的表达量可达菌体总蛋白量的45.2%。重组蛋白包涵体溶解、复性后用Ni~(2+)组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为单一区带,其相对分子质量为41

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