本文证明了恶臭假单胞菌可以产褐藻胶裂解酶,首先筛选并合成了恶臭假单胞菌Pseudomonas putida KT2440中褐藻胶裂解酶基因(alginate lyase,Aly),基因大小为1116 bp,编码372个氨基酸。通过对比筛选出了NdeⅠ与EcoRⅠ为酶切位点进行双酶切,将酶切后目的基因连接到同样双酶切的pET-28a(+)克隆载体上,构建pET-28a(+)-Aly重组质粒,导入BL21里构建异源表达系统,经1 mM的IPTG诱导后,可高效表达目的蛋白。在酶学性质方面,实验表明该褐藻胶裂解酶反应的最适pH值为7.5,最适温度为45℃,最适NaCl浓度为0.5 M,底物专一性实验证明该褐藻胶裂解酶为偏好poly M的双功能酶。利用Design Expert软件中Box-Behnken实验设计的原理,作三因素三水平的响应面分析试验,实验结果表明,当反应在温度为47℃、pH为8.0、NaCl浓度为0.6 M的条件下进行时,可得最大酶活力231 U/mL,比酶活力为189.3 U/mg,在目前报道的褐藻胶裂解酶的比活力中处于较高的水平。根据测得的酶学条件为基础,研究重组菌的发酵条件,通过单因素试验,找到对发酵所得总酶活有显著影响的因素为葡萄糖浓度、接种量、初始pH以及IPTG浓度。根据Box-Behnken实验设计的原理,作四因素三水平的响应面分析试验,结合RSM给出的优化结果,对实验进行修改,结果表明其他因素均在最适的条件下,当发酵的葡萄糖添加量为10 g/L、接种量为1.3%、初始pH为8.2、IPTG诱导浓度为1 mM时,可得最大发酵总酶活为225 U/mL。酶解产物经过TLC验证主要为二糖,可判断该褐藻胶裂解酶为内切酶;酶解产物的抑菌实验表明该褐藻胶裂解酶酶解产物对大肠杆菌、乳酸菌及枯草芽孢杆菌都有一定的抑制作用,与过氧化氢降解法所得的褐藻寡糖相比,抑菌作用还有待提高;抗氧化性实验表明,该褐藻胶裂解酶酶解产物具有清除自由基的的能力,在清除DPPH自由基实验中,该酶酶解产生的褐藻寡糖IC50为0.46mg/ml。