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目的探讨自噬与凋亡在三邻甲苯基磷酸酯（Tri-ortho-cresyl phosphate，TOCP）诱发SH-SY5Y细胞神经毒性中的关系，进一步阐述TOCP神经毒性的作用机制。方法1．采用RNAi技术，构建pGenesil-1-Beclin1-shRNA真核表达载体；将重组质粒转染SH-SY5Y细胞，G418筛选出Beclin1稳定低表达的SH-SY5Y细胞系（sh-Beclin1细胞系），RT-PCR与Western blot检测sh-Beclin1细胞系Beclin1基因的mRNA与蛋白表达。2．不同浓度TOCP（0，0.5mM）分别处理SH-SY5Y细胞与sh-Beclin1细胞48h，MDC染色观察两组细胞系自噬泡的数量变化，Western blot检测两组细胞中LC3-II蛋白的表达。3．不同浓度TOCP（0，0.25，0.5，1.0mM）分别处理SH-SY5Y细胞与sh-Beclin1细胞48h，Hoechst33258染色观察两组细胞系细胞核形态，流式细胞仪检测两组细胞系细胞周期的变化,Western blot检测两组细胞系凋亡相关基因Bax，Bcl-2，Caspase-3蛋白的表达。结果1．测序证实pGenesil-1-Beclin1-shRNA真核表达载体构建成功。荧光显微镜观察、RT-PCR和Western blot技术鉴定Beclin1基因稳定敲减SH-SY5Y细胞系建立成功。2．MDC染色结果和Western blot结果显示，与对照组SH-SY5Y细胞比较，TOCP (0.5mmol/L)处理sh-Beclin1细胞系48h后，产生自噬泡的数量明显减少，LC3-II蛋白表达明显降低。3．与对照组SH-SY5Y细胞比较，sh-Beclin1细胞经不同浓度TOCP（0，1.0mM）处理48h后进行Hoechst33258染色，在荧光显微镜下可见细胞核蓝色荧光增强，染色质聚集明显，且有部分细胞出现细胞核碎裂、溶解，细胞出现典型的凋亡现象，且产生核碎裂的细胞数量随TOCP浓度升高而增加。4．不同浓度的TOCP（0，0.25，0.5，1.0mM）处理SH-SY5Y细胞和sh-Beclin1细胞48h后，流式细胞仪检测细胞周期结果显示：与对照组SH-SY5Y细胞比较，sh-Beclin1细胞G1期前有亚二倍体凋亡峰的出现，并凋亡细胞数量随着TOCP浓度增高而增多，并呈现剂量-效应关系（P<0.05）。5．不同浓度的TOCP（0，0.25，0.5，1.0mM）处理SH-SY5Y细胞和sh-Beclin1细胞48h后，Western blot检测凋亡相关蛋白结果显示：在SH-SY5Y细胞中，凋亡相关蛋白bcl-2/bax比值无升高或降低趋势，Cleaved-caspase-3蛋白表达无显著变化，在sh-Beclin1细胞中，凋亡相关蛋白bcl-2/bax比值呈降低，并呈剂量-效应关系（P<0.05），cleaved-caspase-3蛋白表达无显著变化。结论1．干扰Beclin1基因的表达可抑制TOCP诱导的SH-SY5Y细胞产生自噬，Beclin1蛋白在TOCP诱导的自噬中起重要的作用。2．TOCP诱发Beclin1基因敲减SH-SY5Y细胞系产生线粒体介导的非Caspase-3依赖的凋亡。