脐橙果皮光泽型突变体及相关基因克隆与表达分析

来源 :江西农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:bohedan
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脐橙果皮光泽型突变体是来自纽荷尔脐橙的芽变品种。该突变体的显著特征是果皮极富光泽。目前,关于这一突变体在相关文献中还未见报道。该突变体的发现,将为研究控制柑橘果皮光泽度蜡质的合成途径、运输途径和果皮光泽型突变体形成的分子机理提供珍贵的材料。本研究以脐橙果皮光泽型突变体和普通纽荷尔脐橙为实验材料,研究该突变体遗传稳定性、生物学性状及蜡质合成中的两个关键基因FATB和CUT1的克隆和表达分析,研究结果如下:1.脐橙果皮光泽型突变体比普通纽荷尔脐橙果面光滑、果皮易剥离、成熟期提前和富有光泽等特点,根据扫描电镜可知脐橙果皮光泽型突变体果皮表面蜡质晶体比普通纽荷尔脐橙稀薄,且该突变体主要生物学性状稳定。2.使用Trizol提取试剂和改进的Trizol法分别提取脐橙叶片和果皮的总RNA,均得到了较好的效果,可直接用于后续实验;运用RT-PCR法成功地从脐橙中克隆出了蜡质FATB基因,利用生物信息学法得出脐橙果皮光泽型突变体的CsFATB基因长1407bp,包含一个1254bp的开放阅读框,编码418个氨基酸,蛋白质分子量为46.06kDa,等电点为7.76。蛋白序列与其它物种的同源性在55%-79%之间;利用半定量RT-PCR表达分析得出,普通纽荷尔脐橙CsFATB基因在叶片和果皮的发育后期表达较强;而脐橙果皮光泽型突变体CsFATB基因在叶片和果皮的发育后期表达较弱。此外,CsFATB基因在脐橙果皮光泽型突变体果皮和叶片的发育早期比普通纽荷尔脐橙表达强,但在成熟期该突变体要比普通纽荷尔脐橙表达弱。3.运用RT-PCR法成功地从脐橙中克隆出了蜡质CsCUT1基因,利用生物信息学法得出脐橙果皮光泽型突变体CsCUT1基因序列与普通纽荷尔CsCUT1基因序列分别在第43位、第258位和第548位存在着差异,脐橙果皮光泽型突变体CsCUT1基因序列包含一个1287bp的开放阅读框,编码429个氨基酸,蛋白质分子量为53.6kDa,等电点为5.30。而普通纽荷尔脐橙CsCUT1基因序列却包含一个1488bp的开放阅读框,编码496个氨基酸,蛋白序列与其他物种的同源性在79%-91%之间;普通纽荷尔脐橙CsCUT1基因在叶片和果皮中为下调表达;而脐橙果皮光泽型突变体CsCUT1基因在叶片和果皮中为上调表达,但在叶片中只有7月表达较强,而在其它月份几乎都不表达。
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