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以17个不同基因型的不结球白菜为试材,采用游离小孢子培养方法,对影响小孢子成胚的因素,促进小孢子胚进一步发育成苗的方法以及小孢子植株倍性及其鉴定方法进行了研究,建立了高效的不结球白菜游离小孢子胚诱导的技术体系。
研究表明,在不结球白菜初花期取2.0~3.0mm长的花蕾最适合进行培养。对花蕾4℃低温预处理的最佳时间为12~24h:接种后小孢子在33℃高温条件下预培养24~30h,可以大大提高胚状体产量。NLN-13和1/2NLN-13是小孢子培养的最佳培养基,对于产胚量低及难成胚的基因型,NB-13培养基更为适宜,外源激素、活性炭和甘露醇对小孢子胚发生及发育没有明显的促进作用。在接种的17个基因型材料中,诱导成功率为71%,产胚量最高达到35.78个/蕾,冬性弱的材料产胚能力大于冬性强的材料。适于小孢子胚进一步分化的培养基为B<,5>+GA<,3>0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂1.2%,在此培养基上子叶形胚状体的出芽率最高达到85.24%;最适宜的生根培养基为MS+IBA0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂0.60%,生根率达100%。通过对小孢子植株倍性鉴定方法的比较研究,认为流式细胞仪检测法是最为快速可靠的方法。鉴定结果表明,四倍体植株所占比例最高,达到56.39%,二倍体植株占39.10%,三倍体植株占3.01%,而单倍体植株仅占1.50%。