线粒体呼吸链复合物II即琥珀酸泛醌氧化还原酶(SQR)是一个跨膜蛋白复合物,复合物II由两个亲水蛋白(黄素蛋白和铁硫蛋白)和两个穿膜蛋白(CybL和CybS)构成,总的分子量大约在125kD左右,这里面包含了从琥珀酸到泛醌传递电子所需的电子传递体。复合物II作为一个完整的膜蛋白复合物在三羧酸循环和有氧呼吸链两个系统中起着积极的传递作用。线粒体复合物II的结构和功能研究为研究线粒体呼吸链电子传递系统和与该复合物相关的人类线粒体疾病提供了一个真实可用的模型。本论文我们从猪心线粒体中通过硫酸铵分级沉淀成功提取了复合物II粗提物,纯度约60%,并且通过羟基磷灰石和分子筛层析柱两步纯化出高通量高纯度(90%)的复合物II,四个亚基清晰可见,依次为黄素蛋白FP,铁硫蛋白IP,大的细胞色素结合蛋白CybL和小的细胞色素结合蛋白CybS;并且尝试其与各种醌抑制剂的结晶实验,来推测并研究了该复合物的醌结合位点。其次我们使用不同还原剂succinate、Na2S2SO3分别处理两种纯度的样品,通过分光光度计检测细胞色素b的氧化还原状态,观测到了不同还原剂影响下的细胞色素b的特征光谱。第三,鉴于线粒体复合体II存在1个还是2个醌结合位点,结论并不一致,我们通过人工构建脂质体,模拟膜蛋白的生理条件,选用了荧光分光光度计通过荧光染料SPQ检测脂质体膜内外酸度变化,证明了线粒体没有质子泵的功能。最后,我们就复合物II(SQR)这个双底物酶进行了酶动力学研究,并希望通过酶修饰进一步研究复合物II的各种生化功能。