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目的构建白介素-18(IL-18)真核表达载体,通过转染技术将IL-18基因转染入舌鳞癌细胞Tscca,同时分别加入不同浓度的二萜生物碱(DA),分别采用流式细胞术、MTT实验检测细胞凋亡与增殖抑制情况,最后通过检测Akt/p-Akt通路探究IL-18联合二萜生物碱对舌鳞细胞Tscca可能凋亡机制。方法1、根据Gen Bank中IL-18 DNA序列,设计并合成IL-18基因特异性引物;2、提取人新鲜血液中单个核淋巴细胞(PBMC),提PBMC的总RNA,RT-PCR方法获得其c DNA,PCR扩增目的片段,构建PEGFPN3-IL-18真核表达质粒,经酶切和测序均鉴定正确后瞬时转染Tscca细胞,荧光显微镜下观察质粒的转染效率;3、DMSO溶解二萜生物碱,调整其浓度为0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.6 mg/ml;4、MTT法及流式细胞术检测空白对照组(未处理Tscca细胞)、IL-18组(仅转染IL-18)、单独二萜生物碱组(分为0.2 mg/ml、0.4 mg/ml、0.6 mg/ml 3组)及联合组(分为IL-18+0.2 mg/ml、IL-18+0.4 mg/ml、IL-18+0.6 mg/ml 3组)对舌鳞癌细胞Tscca生长的影响与细胞凋亡情况;5、Western blot实验检测各组细胞信号调节激酶Akt/p-Akt的蛋白水平,分析IL-18联合二萜生物碱是否在此条通路发挥一定作用从而抑制舌癌细胞Tscca的增殖。结果1、成功构建PEGFPN3-IL-18真核表达质粒;2、成功转染舌鳞癌细胞,且荧光镜下观察转染PEGFPN3-IL-18真核表达质粒的Tscca细胞较未转染细胞凋亡增加;3、二萜生物碱浓度为0.2、0.4、0.6 mg/ml时,随浓度增大Tscca细胞凋亡增多,且均有p<0.05,差异有统计学意义;4、IL-18与二萜生物碱联合对Tscca细胞作用48 h后,较单独使用二萜生物碱抑制作用明显,且呈浓度依赖性,均有p<0.05,差异有统计学意义;5、IL-18联合二萜生物碱还可剂量依赖性地降低p-Akt的蛋白水平,各组均有p<0.05,差异有统计学意义,而总Akt水平几乎不变。结论1、二萜生物碱对Tscca细胞有增殖抑制及促凋亡作用,且呈浓度依赖性;2、IL-18联合二萜生物碱对舌鳞癌细胞Tscca有协同抑制作用,且抑制作用较单独使用IL-18或二萜生物碱均较强;3、IL-18联合二萜生物碱在抑制p-Akt的表达及活化这条信号通路上发挥一定作用从而抑制舌癌细胞Tscca的增殖并促进其凋亡。