【摘 要】
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研究目的:通过细胞实验探讨华蟾素注射液对胶质瘤（Gliomas,LGG）U87细胞增殖、凋亡、迁移的影响。研究方法:1华蟾素（Chinese Toad）注射液对胶质瘤细胞毒性检测:培养完成胶质瘤U87细胞后,加入不同浓度的华蟾素注射液,再次在恒温培养箱中培养24小时。加入10ul CCK-8溶液,继续培养,用酶标仪检测在450nm处的吸光度值。2华蟾素注射液对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响:取对数生长
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研究目的:通过细胞实验探讨华蟾素注射液对胶质瘤（Gliomas,LGG）U87细胞增殖、凋亡、迁移的影响。研究方法:1华蟾素（Chinese Toad）注射液对胶质瘤细胞毒性检测:培养完成胶质瘤U87细胞后,加入不同浓度的华蟾素注射液,再次在恒温培养箱中培养24小时。加入10ul CCK-8溶液,继续培养,用酶标仪检测在450nm处的吸光度值。2华蟾素注射液对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响:取对数生长期的胶质瘤U87细胞,培养完成后,将细胞分为对照组,400ug/ml组,800ug/ml组。（1）Western Blot检测凋亡相关蛋白:Western Blot检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的蛋白量。（2）流式细胞术检测细胞凋亡率:各组细胞培养加药干预后,用不含EDTA的0.25%的胰酶消化,收集细胞,加入反应试剂。反应完成后流式细胞仪检测细胞凋亡率。（3）显微镜下观察各组细胞生长状态:细胞加药干预后,在显微镜下观察各组细胞形态,数量的差异。（4）RT-PCR检测凋亡相关基因的表达:RT-PCR检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2的基因量的表达。研究结果:1 CCK-8检测华蟾素对胶质瘤细胞的毒性试验,发现药物浓度在400ug/ml以上时作用效果较明显;2 RT-PCR实验:胶质瘤U87细胞暴露在华蟾素溶液中24小时后,胶质瘤细胞凋亡因子Bax、Caspase-3、Caspase-9的m RNA水平均明显升高（**p<0.01）,Bcl-2 m RN A明显降低（**p<0.01）。流式细胞仪检测胶质瘤细胞的凋亡率:对照组、400ug/ml组,800ug/ml组,细胞凋亡率具有明显差异,差异具有统计学意义（P<0.05）。Western Blot试验结果显示:对照组、400ug/ml组,800ug/ml组的Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白量依次增高,Bax与Bcl-2的比值依次增加。显微镜下观察华蟾素注射对胶质瘤细胞的影响:对照组、400ug/ml组,800ug/ml组,细胞数量依次减少,对照组与400ug/ml组差距最大。研究结论:华蟾素注射液可明显抑制胶质瘤U87细胞的增殖;增加胶质瘤细胞凋亡基因的表达,促进胶质瘤U87细胞凋亡。
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