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目的:近年来,由于抗生素的广泛应用,导致一系列耐药菌的不断出现,如鲍曼不动杆菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、结核杆菌等。细菌耐药问题已经成为全球抗感染领域关注的焦点问题,人类面临再次步入“前抗生素”时代的可能。为此,本研究以革兰阴性的多耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌为对象,拟通过噬菌体裂解的方法,寻找新的可以对抗多耐药菌感染的抗菌剂,为多耐药菌临床感染治疗提供新的研究思路。 方法:以临床上分离到的多耐药铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌为宿主菌,从环境中分离和鉴定针对这些耐药菌的噬菌体。利用双层琼脂平板法和氯化铯不连续密度梯度离心法进行纯化,电镜观察噬菌体的形态和大小,并测定其效价、宿主谱、酸碱稳定性和热稳定性,绘制一步生长曲线、吸附曲线和感染曲线等。同时噬菌体经过氯化铯不连续密度梯度离心法纯化后抽取 DNA并进行全基因组测序分析。 结果:分离到了1株铜绿假单胞菌噬菌体D204和1株鲍曼不动杆菌噬菌体D218。进一步对多耐药铜绿假单胞菌噬菌体D204和多耐药鲍曼不动杆菌噬菌体D218进行了全面的生物学特性和基因组序列分析研究。结果发现这两株噬菌体均为烈性噬菌体。D204为短尾噬菌体,D218为长尾噬菌体。此两株噬菌体均对pH及温度的耐受范围较宽,裂解宿主菌时吸附速率快、潜伏期短、裂解能力强、裂解量大。基因组测序结果表明D204基因组全长为50609bp,D218基因组全长102449bp。D204及D218基因组上均有一个溶菌酶编码基因,同属于溶菌酶类家族(cl00222)。