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目的：根据GenBank登录的淋球菌WHO—A株的NspA核酸序列设计引物，扩增出NspA基因，构建真核表达载体pcDNA3.1(+)／NspA，直接肌注免疫BALB／c小鼠，观察其所诱导产生的体液免疫和细胞免疫应答水平，为研制新型、高效的淋球菌核酸疫苗提供实验依据。 方法：用PRIMER5.0软件设计引物，PCR扩增NspA全基因；将PCR产物纯化后与pUCm-T载体相连，经蓝白斑筛选、双酶切鉴定及测序鉴定后，亚克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中；阳性克隆经双酶切及测序鉴定后转染RAW264.7和COS-7细胞，用RT-PCR检测NspA mRNA的水平，免疫细胞化学法检测蛋白表达。以pcDNA3.1(+)／NspA肌注免疫6w龄BALB／c小鼠，试管凝集法检测免疫小鼠血清中抗NspA抗体水平，ELISA双抗体夹心法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ水平，MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应，PCR检测淋球菌NspA基因在小鼠股四头肌的存在。 结果：成功构建了pcDNA3.1(+)／NspA真核表达载体，以脂质体转染RAW264.7和COS-7细胞后，用RT-PCR检测NspA mRNA的水平，免疫细胞化学法检测蛋白表达，表明重组质粒能在真核细胞有效转录和表达NspA。小鼠接种pcDNA3.1(+)／NspA核酸疫苗后，能产生抗NspA的特异性抗体，其滴度随着时间的增加和加强免疫而增高，6w后抗体最高滴度达1∶640。核酸疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞经PHA刺激后，培养上清中IFN-γ含量明显升高(169.71±30.52pg／mL)，与空质粒组(23.79±11.85pg／mL)和PBS组(8.71±2.50pg／mL)之间有显著性差异(P＜0.01)。脾淋巴细胞增殖反应测定，未加PHA时，T淋巴细胞呈单个分布，无细胞增殖；加入PHA后，核酸疫苗组细胞增殖明显活跃，细胞成团增长，而对照组细胞增殖不