生脉饮治疗慢性心衰大鼠的实验研究

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目的:1临床上常用生脉饮来治疗或辅助治疗慢性心力衰竭。生脉饮成方制剂被2005年版、2010年版中华人民共和国药典(第一部)收载。药典中生脉饮质量标准的提取工艺用渗漉法,而传统的提取工艺则用水煮法。笔者用相同的给药剂量比较了这两种提取工艺的生脉饮提取物治疗慢性心衰大鼠效果,为生脉饮临床应用提供理论依据。2用低中高三种剂量的渗漉提取物治疗慢性心衰大鼠,选用不同层次的多项实验指标进行观察和检测,对生脉饮抗慢性心衰的作用机理和量效关系做初步研究。为生脉饮治疗慢性心衰的物质基础研究、生脉饮的二次开发提供理论依据。方法:1药材提取方法提取生脉饮的处方采用药典生脉饮质量标准中的处方。渗漉提取法参照药典中生脉饮质量标准的制法。水煮法则用传统的方法。2慢性心衰大鼠模型的建立雄性Wistar大鼠按1.5mg·kg-1体重剂量腹腔注射阿霉素,每周2次,共7周,累积总量21mg·kg-1体重进行造模;正常组(n=6)则注射相同体积的生理盐水。3动物分组及给药方法将造模的Wistar大鼠随机分成六组:模型组(n=10)、阳性药物组(n=8)、渗漉低剂量组(n=8)、渗漉中剂量组(n=8)、渗漉高剂量组(n=8)、水提组(n=8)。正常组(n=6)维持不变。从第8周开始,即停止注射阿霉素后,每天上午8:00-9:00时,灌胃(ig)给药1次,连续给予灌胃四周。阳性药物组:卡托普利按13.5mg·kg-1剂量给药;渗漉低剂量组:按3g·kg-1剂量(以生药材量计)给药;渗漉中剂量组:按9g·kg-1剂量(以生药材量计)给药;渗漉高剂量组:按27g·kg-1剂量(以生药材量计)给药;水提组:按3g·kg-1剂量(以生药材量计)给药;正常组灌服等量蒸馏水;模型组灌服等量蒸馏水。4观察指标与方法4.1给药期间观察各组大鼠食欲、毛色、体态等一般情况、行为体征、死亡状况。4.2给药四周后,用生物机能试验系统测定各组大鼠血流动力学指标。4.3实验结束前,大鼠禁食(不禁水)12小时,然后取血清,取内脏。称重各脏器,计算各脏器系数。4.4取各组大鼠心脏,做病理切片观察其组织学变化。4.5按照丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒说明书检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。4.6采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清脑钠肽(BNP)浓度。操作步骤参照大鼠脑钠素(BNP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算各组大鼠血清脑钠肽(BNP)浓度。结果:1不同提取工艺结果比较与渗漉低剂量组相比,水提组大鼠精神萎靡不振,活动量、进食量减少。水提组大鼠心肌组织受损程度比渗漉低剂量组大。与模型组相比,渗漉低剂量组大鼠血清脑钠肽(BNP)水平极显著降低,降低到了正常组大鼠水平附近;水提组大鼠血清脑钠肽(BNP)水平甚至比模型组水平稍高。两种提取物均能降低慢性心衰大鼠血清中MDA、LDH、CK活性,升高SOD水平。渗漉低剂量组和水提组大鼠SP、DP、AP、dp/dtmax较模型组极显著上升。2不同剂量结果比较渗漉低剂量组大鼠的一般状况、行为体征和阳性药物组相当,与正常组大鼠接近;渗漉中剂量组大鼠状况比模型组大鼠稍好;渗漉高剂量组大鼠状况、行为体征与模型组大鼠接近。渗漉高剂量组大鼠的死亡率很高。随着剂量的增大,渗漉提取物对慢性心衰大鼠血流动力学指标的影响并没有呈现规律性变化。渗漉提取物三组实验大鼠随着剂量的增大,心肌组织受损程度增大。随着剂量的增大,渗漉提取物对慢性心衰大鼠血清SOD、LDH含量的影响并没有呈现规律性变化,血清MDA、CK水平变化趋势呈现规律性变化。随着渗漉提取物剂量的增大,大鼠血清脑钠肽(BNP)水平增高;渗漉高剂量组大鼠血清脑钠肽(BNP)水平比模型组水平还稍高。结论:1渗漉提取工艺治疗慢性心衰大鼠的效果比水提工艺好,而且渗漉提取工艺的提取率比水煮提取工艺高。2渗漉提取物随着剂量的增大治疗慢性心衰大鼠的疗效递减。对其作用机理作了初步探讨:渗漉低剂量提取物能改善慢性心衰大鼠血清中神经内分泌脑钠肽的水平,阻断神经内分泌系统的激活,可以慢慢地修复受损的心肌组织和改善恶化的心肌功能,从而起到治疗慢性心衰作用。
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