禾谷镰刀菌CFEM基因家族的生信分析及功能研究

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禾谷镰刀菌可以侵染小麦、大麦、玉米等多种禾谷类作物,造成严重的产量损失。更为严重的是禾谷镰刀菌可以产多种真菌毒素,严重威胁人畜健康。其中,以脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)毒素最为常见。因此,有效控制小麦赤霉病的发生对粮食生产和安全非常重要。现有研究表明,丝状真菌CFEM蛋白在致病过程中起到重要作用。而当前有关禾谷镰刀菌CFEM蛋白的研究非常少,该基因家族在其致病、生长发育等方面的具体功能尚不清楚,相关的调控机理还有待深入研究。本论文对禾谷镰刀菌CFEM基因家族进行了系统的生物信息学分析,并进一步通过基因定向敲除技术对该家族基因的生物学功能进行了深入研究。研究获得的主要结果如下:(1)通过多轮比对分析,在禾谷镰刀菌基因组中共鉴定到23个CFEM基因(分别命名为Fg CFEM1~23)。利用相关工具对所有23个Fg CFEM基因及编码蛋白进行了系统分析,主要包括:信号肽分析、亚细胞定位、跨膜结构域分析、GPI修饰位点鉴定、效应子预测等。通过保守结构域分析,在禾谷镰刀菌CFEM基因家族中鉴定到了2个新的保守结构域,分别命名为CFEM_WR和CFEM_KF。(2)人工接种小麦材料后,对禾谷镰刀菌进行了转录组分析,结果表明,23个CFEM基因接种小麦后均有表达,其中7个CFEM基因的表达量显著上调。结合生物信息学分析结果,Fg CFEM11和Fg CFEM23被鉴定为候选效应因子,可能在禾谷镰刀菌致病过程中起到重要作用。本研究结果为进一步分析CFEM效应子在植物病原真菌中的作用提供了理论依据。(3)构建获得了23个FgCFEMs基因定向敲除突变体并进行了表型分析。结果表明,与野生型菌株PH-1相比,部分突变体在生长速率(ΔFgcfem2、ΔFgcfem18和ΔFgcfem21)、产孢能力(ΔFgcfem8和ΔFgcfem18)、致病力(ΔFgcfem3、ΔFgcfem4、ΔFgcfem6、ΔFgcfem8、ΔFgcfem11和ΔFgcfem16)、产毒能力(ΔFgcfem1、ΔFgcfem3、ΔFgcfem5、ΔFgcfem18)等方面存在显著缺陷。该研究结果表明,禾谷镰刀菌CFEM蛋白与其生长发育、产孢、致病和产毒有关,相关结果为深入研究禾谷镰刀菌的生长发育及致病机制提供了重要的依据。
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