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研究背景:强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一种慢性免疫介导的炎性关节炎,主要侵袭轴向关节和外周大关节,严重者可致脊柱畸形或强直。大量研究已证实自噬与多种风湿性疾病的进展有关,包括系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、骨关节炎和系统性硬化症等。自噬是细胞通过溶酶体或液泡分解其成分以维持细胞正常生理活性和体内稳态的重要机制,其可分为巨自噬、微自噬和伴侣介导的自噬3类。自噬是一个多步骤、多途径的过程,其受多种自噬相关基因(autophagy-relatedgene,ATG)的调节。但目前自噬在同为风湿性疾病的AS发病中的机制研究甚少,研究主要集中在ATG基因多态性与AS的关联性及ATG在不同组织中的表达,而ATG表达水平与AS患者体内的炎症是否相关以及ATG是否可作为AS疾病活动评判尚未见报道。研究发现肿瘤坏死因子α(TNF-α)可刺激诱导多种细胞自噬,以拮抗体内TNF-α发挥作用的TNF-α抑制剂(TNFi)治疗AS疗效明确,但其具体机制尚不完全清楚,TNFi是否可通过影响AS患者的细胞自噬发挥其抗炎作用目前尚未可知。目的:研究自噬相关基因在AS患者及不同疾病活动分期外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达情况,同时观察AS患者予肿瘤坏死因子抑制剂治疗前后自噬相关基因表达水平的变化,初步探讨自噬是否参与AS的发病、自噬相关基因与AS疾病活动的关系以及肿瘤坏死因子抑制剂治疗对AS患者自噬水平的影响。方法:1.分别收集30例活动期AS(AAS:BASDAI≥6,或6>BASDAI>4且 ESR>22mm/h,或 6>BASDAI>4 且 hsCRP>9mg/L)患者、30 例稳定期AS(IAS:BASDAI≤4)患者及30例健康对照者(HC)临床资料及外周血,分离提取PBMCs后再提取总RNA,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测自噬相关基因 LC3、Beclin1、ATG3、ATG5、ATG12、ATG16L1 在三组PBMCs中的表达情况。通过Spearman相关检验分析LC3、Beclin1、ATG3、ATG5、ATG12和ATG16L1水平与AS不同疾病活动度和临床实验室指标之间的相关性。2.18例AS患者给予TNFi连续治疗3个月,收集其治疗前后的临床资料及外周血,分离提取PBMCs后提取总RNA,以RT-qPCR检测研究对象PBMCs中的自噬相关基因LC3、Beclin1、ATG3、ATG5、ATG12、ATG16L1表达水平,对比AS患者治疗前后PBMCs中的自噬相关基因 LC3、Beclin1、ATG3、ATG5、ATG12、ATG16L1 的表达差异。结果:1.(1)LC3、ATG5、ATG12、ATG16L1 在 AS 患者 PBMC中的表达显著低于 HC 组[LC3:4.25(3.74)× 10-4 vs 6.92(4.42)× 10-4;ATG5:5.65(2.57)×10-3 vs 7.78(3.77)×10-3;ATG12:6.00(3.74)×10-3 vs 10.30(4.27)×10-3;ATG16L1:2.14(1.36)×10-3 vs 3.13(2.30)×10-3,P均<0.05],而Beclin1、ATG3 表达在两组中无显著差异[Beclin1:5.63(3.19)×10-3 vs 5.41(2.62)×10-3;ATG3:11.57(5.22)×10-3 vs 9.65(4.96)×10-3,P均>0.05]。(2)LC3表达水平在AAS组、IAS组均显著低于HC组(P均<0.05),而AAS与IAS组之间差异无统计学意义(P>0.05)[LC3 AAS:4.51(2.90)×10-4 vs IAS:4.00(4.01)× 10-4 vs HC:6.92(4.42)× 1 0-4]。Beclin1表达水平在AAS、IAS和HC三组之间均无显著差异(P均>0.05)[Beclin1:5.10(2.45)× 10-3 vs 6.67(3.91)×10-3 vs 5.42(2.62)×10-3]。ATG3 表达水平在 IAS组显著高于HC组(P<0.05),而AAS组与IAS组、HC组均无显著差异(P均>0.05)[ATG3:10.22(4.98)×10-3 vs 12.64(5.66)×10-3vs 9.65(4.96)×10-3]。ATG5在AAS组的表达水平显著低于IAS组与HC组(P均<0.05),而其在IAS组与HC组之间差异无统计学意义(P>0.05)[ATG5:5.05(1.94)×10-3 vs 6.21(3.69)×10-3 vs 7.78(3.77)×10-3]。ATG12 表达水平在AAS组与IAS组中均显著低于HC组(P均<0.05),且AAS组也显著低于IAS 组(P<0.05)[ATG12:5.91(2.31)×10-3 vs 7.94(4.63)×10-3 vs 10.30(4.27)×10-3]。ATG16L1表达水平在AAS组显著低于HC组(P<0.05),但IAS组与AAS组及HC组之间均无显著差异(P均>0.05)[ATG16L1:2.06(0.81)×10-3 vs 2.60(1.89)×10-3 vs 3.13(2.30)×10-3]。(3)ATG5、ATG12 表达水平与 BASDAI、ESR、hsCRP 呈显著负相关(P均<0.05),ATG3表达水平与BASDAI、BASFI、ESR之间呈显著负相关(P 均<0.05),而 LC3、Beclin1、ATG16L1 与 BASDAI、BASFI、ESR、hsCRP无明显相关性(P均>0.05)。2.(1)治疗后AS患者BASDAI、BASFI评分及血清ESR及hsCRP均较治疗前显著降低(P均<0.05)。(2)治疗前后 AS 患者 PBMCs 中 LC3、Beclin1、ATG3、ATG5、ATG12、ATG16L1的表达水平均无统计学差异(P均>0.05)[LC3:5.05(4.27)×10-4 vs 4.83(1.99)×10-4;Beclin1:7.36(3.73)×10-3 vs 5.63(3.65)×10-3;ATG3:9.97(7.21)×10-3 vs 11.38(10.48)×10-3;ATG5:5.62(4.67)× 10-3 vs 5.17(6.05)×10-3;ATG12:5.31(3.55)×10-3 vs 4.81(4.89)×10-3;ATG16L1:3.48(3.55)×10-3 vs 2.47(1.72)× 10-3]。结论:1.AS患者的自噬相关基因表达水平降低提示AS患者存在自噬功能障碍,自噬可能作为一种“稳定剂”调控AS发生发展。2.ATG5和ATG12在AAS患者中表达较IAS患者显著降低,且与疾病活动指数和炎症指标均呈负相关,提示其可能参与AS炎症调节,有望作为评估AS病情活动度的生物标志物。3.TNFi治疗后AS患者疾病活动指标显著降低,而自噬相关基因表达水平与治疗前无显著差异,提示TNFi治疗有效抑制AS患者体内炎症,但其可能未直接通过细胞自噬参与该炎症调节过程。