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鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的鸭病称为鸭传染性浆膜炎,该病呈败血症形式,以纤维素性心包炎、肝周炎、脑膜炎、气囊炎和神经症状以及部分病例出现干酪样输卵管炎、结膜炎、关节炎为特征,是养鸭业最为严重的传染病之一,至今几乎存在于所有养鸭地区。该细菌的感染,以发病率和死亡率高、生长性能下降、肉品质量下降、预防和治疗费用增加等造成严重的经济损失。由于RA耐药性严重,菌株的血清型众多且缺乏交叉免疫保护,现有免疫接种和抗菌药物治疗措施在生产中的应用受到一定的限制。补体(complement,C)系统是人和动物固有免疫系统重要的组分之一,不但是机体防御病原体的第一道防线,参与清除“危险信号”,而且在调控炎症反应和免疫应答的过程中也发挥极其重要的作用。补体活性的高低,是动物的补体系统抵抗入侵病原微生物能力大小的标志。检测补体的单个成分及补体的活性测定对于机体免疫系统的功能评价,疾病的诊断与治疗,流行病学调查等均有重要作用。本试验选取四川麻鸭为研究对象,通过建立鸭疫里默氏菌感染模型来研究RA感染前后鸭补体活性的变化、C3d基因和CR2基因的m RNA表达变化及C3d和s CR2蛋白含量的变化,旨在揭示鸭疫里默氏杆菌(RA)感染对鸭补体系统的影响,为进一步研究补体在鸭抗RA感染免疫中的作用奠定基础。本研究的主要结果如下:1.麻鸭RA感染模型的建立实验条件下饲喂的10日龄四川麻鸭腿部皮下注射RA菌液0.2m L/只(1×109cfu/m L),接种后168h内发病率80%、死亡率70%,其中接种后24h出现明显的临床症状、死亡高峰期在36h~60h。病死鸭解剖表现出全身浆膜及各组织器官的被膜纤维素渗出附着,呈现典型的纤维素性心包炎、肝周炎;心脏、肝脏、脾脏充血肿大。2.麻鸭血清补体活性的变化利用溶血素致敏鸡红细胞及固定血清稀释度(1:5)测定麻鸭血清总补体溶血活性。利用1%兔红细胞及固定血清稀释度(1:5)测定血清补体旁路途径溶血活性。麻鸭血清总补体溶血活性1~15d逐渐升高,15~21d趋于稳定并接近成年麻鸭;旁路途径溶血活性1~15d逐渐升高,15~21d趋于稳定并接近成年麻鸭。10日龄麻鸭人工感染RA,血清总补体溶血活性在感染后12~24h升高,且高于对照组;36~48h逐渐降低,48~168h逐渐升高,但都低于对照组。血清旁路途径溶血活性在感染后12~48h逐渐降低,48~168h逐渐升高,但都低于对照组。3.麻鸭C3d、CR2 m RNA表达的变化根据Genebank上发表的鸭C3d基因序列(登录号:EU847624.1)、鸭CR2的EST序列(登录号:DR765735.1)设计引物,分别以肝脏和脾脏提取总RNA为模板建立RT-PCR,克隆测序得到四川麻鸭C3d和CR2基因片段分别为991bp和347bp。在NCBI上比对发现四川麻鸭C3d基因与绿头鸭C3d基因相似性达99%,四川麻鸭CR2基因与卷羽鹈鹕CR2基因相似性达90%。依据已获得的C3d、CR2基因序列设计荧光定量PCR引物,以鸭β-actin基因作内参基因,1日龄作对照,采用2-△△Ct法进行C3d、CR2 m RNA的表达分析。麻鸭C3d m RNA在1~12d表达升高,12~21d表达趋于稳定;CR2 m RNA的表达不规律,在1.00~2.87倍之间,3、6、9、12、15、18和21d的表达分别是1d的1.73倍、1.45倍、2.55倍、1.68倍、1.39倍、1.82倍和2.87倍。10日龄麻鸭人工感染RA后,C3d m RNA的表达12~48h逐渐降低,48~168h逐渐升高,且都低于对照组;CR2 m RNA的表达在感染后12~48h逐渐降低,48~168h逐渐升高,且都低于对照组。4.麻鸭C3d、s CR2蛋白含量的变化根据鸭C3d ELISA试剂盒和鸭可溶性白细胞分化抗原21(CR2/s CD21)ELISA试剂盒操作说明分别测定麻鸭C3d和s CR2的蛋白含量。麻鸭血清中C3d蛋白含量在1~9d平稳,9~15d升高,15~21d趋于稳定;麻鸭s CR2蛋白含量在1~21d处于一个较平稳的水平。10日龄麻鸭人工感染RA后,血清C3d蛋白含量在感染后12~168h比对照组高;s CR2蛋白含量在感染后12~72h高于对照组,而在感染后168h低于对照组。