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第一部分多发性骨髓瘤患者血清OPG检测及临床意义【目的】护骨素(osteoprotegerin,OPG)是近来研究发现在多发性骨髓瘤骨病发生发展中起重要作用的因子。本研究旨在探讨OPG在多发性骨髓瘤患者血清中的表达水平及其与骨病、预后的关系,初步探索其在多发性骨髓瘤骨病和预后判断中的作用。【方法】收集28名多发性骨髓瘤患者试验组和28名眼科患者对照组的血清,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)技术分别检测血清中的OPG水平。【结果】多发性骨髓瘤患者的血清OPG水平为(222.4±114.8)pg/ml,与对照相比明显降低(P<0.01)。骨损0-1个组患者血清OPG水平为(312.4±129.6)pg/ml,而2-3个组为(179.0±59.4)pg/ml,0-1组明显高于2-3组(P<0.01)。多发性骨髓瘤患者血清OPG水平与β2-微球蛋白有关(P<0.01),与白蛋白可能有关(P=0.0696),与球蛋白相关(P<0.01),与临床分期、免疫学分型、血红蛋白、血钙未发现有相关性。【结论】多发性骨髓瘤患者血清OPG水平明显低于对照,且其降低程度与骨损害的严重程度密切相关;同时,OPG水平与β2-微球蛋白呈负相关,而β2-微球蛋白是反映多发性骨髓瘤预后的明确指标,提示血清OPG水平可能对多发性骨髓瘤的预后具有重要意义。第二部分雌二醇对多发性骨髓瘤成骨细胞病理机制的干预作用【目的】本研究旨在探讨17β-雌二醇(17β-oestradiol,E2)对体外培养的多发性骨髓瘤共培养条件下的成骨细胞增殖、碱性磷酸酶活性、矿化结节形成能力和基因表达的作用,探索其在多发性骨髓瘤骨病的治疗中的作用。【方法】以含20%多发性骨髓瘤细胞条件培养基的DMEM常规培养原代成骨细胞,以各浓度的17β-雌二醇作用于成骨细胞,24小时后用MTT法检测细胞的增殖变化;48小时后检测ALP活性;14天后茜素红染色测定矿化结节形成情况。将MM细胞与成骨细胞共培养,以E2作用成骨细胞,48小时后用RT-PCR法检测成骨细胞RANKL与OPG的基因表达,培养上清中的RANKL与OPG浓度用ELISA法测定。【结果】在多发性骨髓瘤条件下,成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性、矿化能力均受到抑制,RANKL表达分泌增强,OPG则降低。10-5～10-8mol/L的雌二醇均能够逆转多发性骨髓瘤对成骨细胞增殖的抑制作用,剂量依赖性的改善MM细胞对成骨细胞生成ALP的抑制;10-6～10-8mol/L的E2能够改善成骨细胞被抑制的矿化能力。在共培养条件下,E2能够抑制RANKL的表达和分泌,增强成骨细胞OPG的表达和分泌,逆转多发性骨髓瘤细胞对RANKL/OPG率的影响。【结论】在多发性骨髓瘤条件下,E2对成骨细胞有促生长增殖的作用;能够增强ALP的分泌和矿化;抑制RANKL的表达和分泌、增强OPG表达和分泌,从而可能抑制成骨细胞对破骨细胞的促进功能,提示E2可能成为治疗多发性骨髓瘤骨病的一种潜在药物。