研究目的水蛭为水蛭科动物蚂蟥Whitmaniapigra Whitman、水蛭Hirudonipponia Whitman或柳叶蚂蟥Whitmaniaacranulate Whitman的干燥全体,目前市场上以蚂蟥(宽体金线蛭)Whitmaniapigra Whitman的干燥全体用量最大。本实验通过对动物蚂蟥进行90天的养殖,定期采样,采用ICP-MS技术和药典法对其进行铬(Cr)、砷(As)、镉(Cd)、汞(Hg)、铅(Pb)、铜(Cu)等重金属元素残留量测定和抗凝血酶活性评价,研究动物蚂蟥的生长环境、摄入饲料、养殖时间与水蛭药材中重金属残留、抗凝血酶效价的关系。通过对市场购买水蛭药材的分割检测,研究水蛭药材不同部位重金属残留和抗凝血酶活性的分布规律。研究内容动物蚂蟥的生长环境、摄入饲料、养殖时间与水蛭药材中重金属残留、抗凝血酶效价的关系；水蛭药材不同部位重金属残留和抗凝血酶活性的分布规律；水蛭药材抗凝血酶活性与重金属元素的含量的关系；水蛭药材重金属元素可能来源。研究方法1.养殖实验部分：本部分包括环境差异养殖实验和饲料差异养殖实验。养殖用蚂蟥幼苗均来自山东微山湖友搏药业蚂蟥养殖基地,日龄约30天,初始重量为2～3g。环境差异养殖实验在8个玻璃水族箱进行,根据不同浓度将养殖土壤进行Cr、Cd、Pb、Cu的人工污染,模拟养殖动物蚂蟥的不同环境,养殖周期90天,采样周期10天,低温烘干。饲料差异养殖实验在72个大口透明PET聚酯塑料瓶中进行,分为田螺、血粉、无饲料组,养殖周期90天,采样周期15天,低温烘干。对加工好的水蛭药材进行重金属含量和抗凝血酶效价检测。2.不同药用部位重金属残留、抗凝活性部分：将药材市场收集来的8份水蛭药材按照水蛭全体体长约三分之一长度分为头部、中部、尾部和全体4组,共得到样品32份,分别对样品进行重金属含量检测和抗凝血酶活性评价。3.重金属含量检测方法：采用电感耦合等离子质谱(ICP-MS)技术对所有水蛭药材样品、实验前后土壤、血粉饲料的6种重金属元素含量进行检测。4.抗凝活性评价方法：采用2015年版《中国药典》中对水蛭药材抗凝血酶活性的测定方法,对所有水蛭药材样品进行抗凝血酶效价评价。实验结果1.对水蛭药材抗凝活性评价采用2015年版《中国药典》中的滴定法,实验室养殖的7个组别中,在实验末期只有高浓度污染组和无饲料组未达到规定标准。在不同药用部位实验中,头部组达标情况最好,达标率为87.5%。2.对水蛭药材重金属残留量检测采用ICP-MS技术进行定量分析,其中Cr元素的回归方程为y=1.2116x-0.1772,R2=0.9999；As元素的回归方程为y=0.0764x-0.001,R2=1；Cd元素的回归方程为y=0.1198x-0.0049,R2=0.9999；Hg元素的回归方程为y=0.8916x+0.0006,R2=0.9999;Pb元素的回归方程为y=6.6566x+0.0734,R2=1 Cu元素的回归方程为y=0.2482x+0.0486,R2=0.9999,而仪器的精密度检测结果显示,六种检测元素3次平行检测值全部在标准物质规定范围之内。ICP-MS技术可以对水蛭药材中微量的重金属元素进行有效检测。结论水蛭药材中抗凝血酶活性与重金属含量的关系并不明显,水蛭药材体内的重金属残留量不会直接影响水蛭药材的有效性；水蛭药材中汞、铬、铜元素含量存在较强的正相关关系,且铅和镉元素含量也互相存在正相关关系。水蛭药材抗凝血酶类物质效价随着动物蚂蟥的养殖时间的延长而增加；高浓度污染的养殖环境会对水蛭药材的抗凝活性产生较大的负面影响。水蛭药材中铬、砷、铅元素含量均会随着养殖时间的增加而增长、铜含量为先增后减,镉、汞元素含量与养殖时间无明显关系；养殖土壤中较高含量的铬、镉、铅元素会对水蛭药材中铬、镉、铅元素残留量产生较大影响,水蛭药材中铜含量与养殖环境中铜元素含量无明显关系。以血粉作为养殖动物蚂蟥的饲料,其水蛭药材的综合质量更优。水蛭药材不同部位重金属元素残留量的关系为头部《全体《中部≈尾部,且Cd元素分布差异不明显；与抗凝血酶类物质效价的关系为头部》尾部≈全体》中部,不同部位质量综合排序为头部》尾部》中部。养殖环境中的土壤、饲料、水质、其他重金属均为水蛭药材中金属元素的来源。创新点首次研究水蛭药材的重金属残留与抗凝血酶活性的相关性。首次在实验室模拟动物蚂蟥生长的环境长时间养殖,并通过设置不同浓度的污染环境、投喂饲料等差异,研究水蛭药材抗凝血酶活性物质、重金属元素累积情况与外部影响因素、生长时间的关系。首次通过将水蛭药材分为不同部位研究其抗凝血酶物质、重金属含量分布规律。