基于DNA酶的电化学和电化学发光生物传感器的研究

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DNA酶是具有催化性质的DNA,在稳定性和成本上优于蛋白质酶和RNA酶。利用类似过氧化物酶的血红素-G-四链体DNA酶和切割RNA的8-17 Pb2+DNA酶可实现广泛目标物检测。电化学传感器操作简单、体积小巧,电化学发光技术有利于降低传感器检出限,提高灵敏度。因此,本论文研究了基于DNA酶的电化学和电化学发光生物传感器,丰富了传感策略。   首先,利用聚多巴胺包埋血红素-G-四链体DNA酶建立了电化学H2O2生物传感器。玻碳电极物理吸附DNA酶后滴涂10μL含有5gL-1多巴胺的磷酸盐缓冲液(pH8.0),借助空气氧化形成聚多巴胺固定DNA酶。DNA酶电催化还原H2O2产生电流实现H2O2检测。证明了G-四链体构象对电化学和光学传感器性能的影响不同。该传感器检出限为2.2μM,线性范围为0.01-1.5 mM。以聚多巴胺固定DNA酶将拓展DNA酶表面分析应用范围。   此外,利用GR-5 Pb2+DNA酶嵌入Ru(phen)32+和识别pb2+的特性构建了电化学发光pb2+生物传感器。巯基修饰底物通过Au-S键固定在Au电极表面后与DNA酶杂交,Ru(phen)32+自发嵌入DNA酶-底物双螺旋结构,加入共反应剂三丙胺由电位阶跃激发电化学发光。DNA酶在pb2+存在时催化切割底物并与底物解离,释放Ru(phen)32+导致发光强度降低,实现pb2+检测。该传感器显示目标特异性,检出限为0.9 pM,线性范围为2-1000 pM,可测定血清中痕量pb2+。嵌入Ru(phen)32+的电化学发光技术结合辅因子相关DNA酶将把测定辅因子生物传感器的性能推向极限。
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