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Netrin-4(NTN4)是神经导向因子Netrins家族在脊椎动物中的新成员,具有导向神经轴突生长的功能。它不仅在神经系统中起作用,同时在多种组织器官中发挥生物学功能。近年来的研究发现,NTN4在肿瘤发生发展中也发挥着重要的调控作用,但目前对NTN4在肿瘤发生发展中的作用仍然存在争议：有研究证明NTN4抑制肿瘤发生发展,也有研究证明它促进肿瘤发生发展。并且,就目前已有研究看,对于NTN4在肿瘤侵袭转移过程中作用的报道很少,大多集中在对肿瘤生长和血管新生的研究。Neogenin (NEO)是神经导向因子家族受体中NTN4的候选受体,在多种肿瘤组织中低表达,目前关于NTN4的功能是否受NEO介导仍然存在争议。且目前为止,没有在肿瘤细胞上关于NTN4与NEO相互作用的研究。因此,它们的相互作用仍有待进一步研究。本论文旨在研究NTN4和NEO在肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭中的作用,并进一步研究和探讨NEO是否介导NTN4的体外功能。HT1080是高转移性的人成纤维肉瘤细胞系,是研究肿瘤侵袭转移的理想模型。我们的研究发现NTN4和NEO在HT1080细胞中都有相对较高的表达。所以,本课题首先通过RNAi技术分别建立NTN4和NEO基因敲低细胞系,研究在体外NTN4及NEO对HT1080细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。其次,体内实验采用斑马鱼肿瘤外植体模型研究HT1080-NTN4和HT1080-NEO敲低细胞系在生物体内转移能力。研究发现敲低NTN4基因的HT1080细胞增殖能力增强,迁移和侵袭能力降低,MMP-9表达量降低,MMP-2无明显变化。而敲低NEO基因的HT1080细胞增殖能力降低,迁移和侵袭能力增强,MMP-2和MMP-9表达量升高。同样,体内转移结果与体外一致。然而在对NEO是否介导NTN4的体外功能的初步研究中,我们发现细胞中添加外源NTN4蛋白可抑制细胞增殖,促进细胞迁移和侵袭,但在敲低NEO后的细胞中再添加等浓度NTN4蛋白,这种抑制增殖和促进迁移和侵袭的作用表现的更为显著,且与只敲低NEO的细胞系相比也更明显。这又说明,在体外NTN4确实有抑制HT1080细胞增殖和促进迁移侵袭的作用,且此作用可能受NEO的介导。此外,在对一些与肿瘤生长以及侵袭转移相关蛋白的检测中发现,HT1080细胞敲低NTN4后Vimentin和P-ERK1/2表达降低,P-p38表达增强；而敲低NEO后则导致Vimentin和P-ERK1/2表达增强,P-p38表达无显著变化。以上研究表明,在HT1080细胞中NTN4可促进细胞的迁移和侵袭,但抑制细胞增殖。而NEO可抑制细胞迁移和侵袭,但促进细胞增殖。至少在HT1080细胞中,二者具有各自的作用和胞内信号传导通路。此外,虽然在HT1080细胞上它们也存在配受体的关系,但这种关系在许多方面也许并不重要。同样,NTN4和NEO还可能分别存在各自的受配体。究竟在什么情况下出现这种现象,以及在如HT1080细胞类型的其他细胞中有关NTN4和NEO相互作用的详细分子机制,还值得进一步研究。